คู่มือการใช้งาน ฟูออเรสเซ็นส์RF5301 PC(ห้อง927)

บทที่ 1 ข้นั ตอนการเตรียมความพร้อมก่อนการเปิ ดใช้งานเครื่อง 1. ตรวจเชค็ การเช่ือมต่อสายไฟ 1.1. การเช่ือมต่อตอ้ งแน่น ไมห่ ลวมเสียบในเตา้ เสียบที่มีสายดิน 1.2. ไมเ่ สียบในเตา้ เสียบท่ีม่เี ครื่องมืออนื่ ๆ เสียบร่วมอยเู่ ป็นจานวนมาก 2. ตรวจเชค็ ตวั เคร่ือง 1.1 สวติ ซ์ Power ON/OFF เครื่องตอ้ งอยใู่ นตาแหน่ง OFF 1.2 สวิต Xe Lamp ON/OFF อยใู่ นตาแหน่ง OFF * 1 คือ สวิตซ์ Power supply 2 คือ สวติ ซ์ ของ Xe lamp 1.3 เช็คการเชื่อมต่อสาย Connector ระหวา่ งคอมครื่อง RF5301 กบั Computer รวมถึงสาย Connector ของ Option 1

2.4. Sample compartment ตอ้ งไมม่ ี Sample หรือ อื่นๆ นอกจาก Sample Holder อยู่ 2

บทท่ี 2 ข้นั ตอนการเปิ ดเคร่ืองและ Log in เข้าใช้งานเคร่ือง 1. เปิ ดสวติ ซเ์ คร่ืองสารองไฟและสวิตซเ์ ตา้ เสียบ 2. เปิ ดสวติ ซ์ Power supply ของเคร่ือง RF5301 กดสวิตซใ์ หอ้ ยใู่ นตาแหน่ง ON ( I ) 3 2 ท่ีหนา้ 3. เปิ ดสวติ ซ์ Xe Lamp โดยเลื่อนสวิตซไ์ ปยงั ตาแหน่ง ON 4. เปิ ดคอมพิวเตอร์ และเขา้ Software โดยดบั เบิ้ลคลิกส์ ที่ไอคอน RFPC Desktop 5. ทาการ Connect เครื่อง Software RFPC กบั เครื่อง RF5301 PC 5.1. เลอื กเมนู Configure › Instrument 5.2. เลอื ก Fluorometer เป็น On แลว้ กด OK 5.3. เครื่องจะทาการ Initialize อตั โนมตั ิ โดยจะมไี ฟแสดงสถานะ สีเขียว = pass, สีเหลอื ง = Testing และ สีแดง= Fail คร่ืองจะใชง้ านไดท้ กุ หวั ขอ้ จะตอ้ งเขียวหมด ถา้ หวั ขอ้ ใดเกดิ Fail ทา ตาม ติดต่อ Shimadzu หรือ ตวั แทนจาหน่ายทนั ที 3

บทที่ 3 ข้นั ตอนการเตรียมพารามิเตอร์สาหรับการวเิ คราะห์ 1. ทาการเลือก Mode ที่ตอ้ งการวเิ คราะห์ ทาไดโ้ ดยคลก๊ิ เมาทท์ ี่ เมนู Acquire Mode 1.1. ความหมายของ Mode - Spectrum ใชส้ าหรับ สเกนหาตาแหน่ง Excitation และ Emission ของสาร - Quantitative ใชส้ าหรับการวิเคราะห์ในเชิงปริมาณ - Time Course ใชส้ าหรับการศกึ ษาการเปลีย่ นแปลงปฏิกิริยาเทียบกบั เวลา 1.2. การต้งั ค่า Parameter ต่างๆ เพ่อื ใชง้ าน เน่ืองจากแต่ละ Mode มีลกั ษณะการใชง้ านที่แตกต่างกนั ออกไป และสารแต่ละตวั ก็ Parameter ที่แตกต่างกนั ออกไปดงั น้นั จึงตอ้ งมกี ารต้งั ค่า Parameter ต่างๆใหเ้ หมาะสมกบั การวิเคราะห์ใน Mode และ สารน้นั ๆ 4

Spectrum Mode - เลือกเมนู Acquire Mode › Spectrum - เลอื ก เมนู Configure › เลือก Parameter เพ่ือเขา้ สู่หนา้ ต่างการต้งั ค่า Parameter (จาก Acquire Mode หากเครื่องหมาย ไม่ได้อย่ทู ี่ Spectrum mode ต้ังแต่แรก เมอ่ื คลิ๊กเมาส์ เลือก Spectrum แล้วหน้าต่าง Parameter จะเปิ ดนขึน้ เองอตั โนมตั ิ ) [Spectrum parameter] Spectrum Type เป็นการเลอื กว่าตอ้ งการสเกนหา Spectrum ในส่วนของ Excitation, Emission หรือ Synchronous EX/EM Wavelength และ EX/EM Wavelength Range ซ่ึงจะสมั พนั ธก์ บั Spectrum Type ดงั น้ี Spectrum Type Spectrum Wavelength Spectrum Wavelength Range (ต้องการศึกษา) (Fixed ความยาวคลน่ี ) (ช่วงความยาวคลน่ื ทีต่ ้องการศึกษา) Excitation EM EX Emission EX EM Synchronous EX EM 5

Synchronous จะเหมอื นกบั Emission จะแตกต่างตอนแสดงผล คือ จะแสดงต้งั แต่ ความยาวคลืน่ ของ EX จนถึงความยาวคลืน่ ต่ากว่าความยาวคลนื่ สุดทา้ ยของ Spectrum Wavelength Range เช่น ต้งั ค่า EX ที่ 340 nm และต้งั ค่า EM Spectrum Wavelength Range ที่ 350-450 nm เครื่องจะทาการแสดงผลที่ 340-440 เป็ นตน้ Recording Range เป็นการกาหนดค่าสเกลในการแสดงผลของค่า Intensity (แกน Y) ต้งั ค่าได้ ต้งั แต่ -100 ถึง 1000 Scan speed ความเร็วในการสเกน จะปรับไดท้ ้งั หมด 5 ระดบั ดงั น้ี Survey, Super, Very Fast, Fast, Medium, Slow และ Very Slow Sampling Interval ความละเอยี ดในการเก็บขอ้ มลู จะมคี วามละเอยี ดต้งั แต่ 0.2, 1.0 และ 2.0 nm สาหรับ ที่ 0.2 nm น้นั จะสมั พนั ธก์ บั Scan speed ถา้ เลอื ก เป็น Survey และสาหรับ Survey, Super และ Very Fast ไมส่ ามารถต้งั ค่า Sampling Interval ได้ Slit Width (nm) EX ควากวา้ งของช่องแสงดา้ น EX Monochrometer สามารถต้งั ค่าได้ 1.5 nm, 3 nm, 5 nm, 10 nm, 15 nm and 20 nm, และ 6 HH สาหรับ 6 HH เป็นการเลอื กท่ี 6 nm Slit Width (nm) EM ควากวา้ งของช่องแสงดา้ น EM Monochrometer สามารถต้งั ค่าได้ 1.5 nm, 3 nm,5 nm, 10 nm, 15 nm and 20 nm, และ \"Close\" ซ่ึง Close จะเป็นการป้ องกนั ไมใ่ หแ้ สงเขา้ สู่ PMT ของ EM Monochrometer อยา่ งไรก็ตามหากเลอื ก PMT Protect ที่ Configure › Instrument เป็น ON แลว้ Slit width จะ Close เองอตั โนมตั ิเมอ่ื ฝาของ Sample compartment ถกู เปิ ดออก Sensitivity ต้งั ค่าได้ 2 ระดบั คือ Low และ High โดยท่ี High จะให้ Sensitivity เป็น 50 เท่า ของ Low Response Time ความเร็วในการส่งสญั ญาณ ต้งั ไดต้ ้งั แต่ 0.02, 0.03, 0.1, 0.25, 0.5, 2.0, 4.0, 8.0 และ Auto 6

Quantitation Mode 7

8

Time Course 9

บทที่ 4 ข้นั ตอนการทาการวเิ คราะห์ Spectrum mode 1. นา Cell ใส่สารละลาย Blank แลว้ ใส่ใน Cell Holder 2. กด Auto Zero เพื่อ Set ศนู ยท์ ุก Wavelength ที่ตอ้ งการวดั 3. นา Cell มาเท สารละลาย Blank ออกแลว้ น้าสารละลายที่ตอ้ งการวดั ใส่แทนลงไป 4. ใส่ใน Cell Holder ปิ ดฝา sample compartment กด Start 5. บนั ทึก File 10

Quantitative 1. นา Cell ใส่สารละลาย Blank แลว้ ใส่ใน Cell Holder 2. กด Auto Zero เพอ่ื Set ศนู ยท์ ุก Wavelength ที่ตอ้ งการวดั 3. กรณีวดั standard เลือก คลิ๊กท่ี Standard (จะกลายเป็นสีเทา) จากน้นั นาสารละลาย standard ใส่ใน Cell Holder กด Read แลว้ ใส่ความเขม้ ขน้ ของ Sample 4. ทาตามขอ้ 3 กบั Standard ทุกตวั จนครบ 5. บนั ทึกขอ้ มลู ของ Standard 11

6. กรณี วดั Sample เลอื กคลิ๊ก ท่ี Unknown 7. จากน้นั นาสารละลายตวั อยา่ ง ใส่ใน Cell Holder กด Read ทาเช่นน้ีกบั ทกุ ตวั อยา่ ง 8. บนั ทึกขอ้ มลู Sample 12

Time Course 1. นา Cell ใส่สารละลาย Blank แลว้ ใส่ใน Cell Holder 2. กด Auto Zero เพอ่ื Set ศนู ยท์ ุก Wavelength ท่ีตอ้ งการวดั 3. นา Cell มาเท สารละลาย Blank ออกแลว้ น้าสารละลายที่ตอ้ งการวดั ใส่แทนลงไป 4. ใส่ใน Cell Holder ปิ ดฝา sample compartment กด Start 5. บนั ทึก File 13

บทที่ 5 ข้นั ตอนการประมวณผล 14

15

16

บทที่ 6 ข้ันตอนการรายงานผล Spectrum 1.1. เลอื ก Peak Pick ใน Manipulate แลว้ 1.2. หนา้ ต่าง Peak Pick เลอื ก Output › แลว้ เลอื ก Graphic plot 17

Quantitative 1. เปิ ดขอ้ มลู ของ Standard และ Unknown ไว้ 2. เขา้ Menu Presentation › Plot.. 3. เลือก ตาแหน่งของขอ้ มลู ท่ีตอ้ งการแสดง แลว้ กด Print \\ 18

บทที่ 7 ข้นั ตอนการปิ ดเครื่อง 1. ตรวจเชค็ Sample Compartment ตอ้ งไมม่ ีตวั อยา่ งคา้ งอยใู่ น Cell Holder 2. เขา้ เมนู Configure > Instrument > เลอื ก OFF ที่ Fluorometer กด OK 3. ปิ ดสวติ ซ์ Xenon Lamp 4. รอ 30 นาที ปิ ดสวิตซ์ Power supply 5. ปิ ดคอมพวิ เตอร์ 6. ถอดปลก๋ั 19

บทท่ี 8 การดูแลรักษาเครื่อง 1. การทาความสะอาด Cuvette - ลา้ งดว้ ยตวั ทาละลาย Sample - ลา้ งดว้ ยน้ากลนั่ - ลา้ งดว้ ย Absolute Ethanol 2. การตรวจเช็คความถูกต้องของเคร่ือง 2.1. Wavelength Accuracy for Emission Monochromator (1) เลือก Mode Spectrum (2) เขา้ เมนู Configure > Instrument เลอื ก OFF \"PMT Protect\" และ \"-HV Control\" (3) ต้งั ค่า Parameter ดงั ภาพ (4) ตรวจเช็ค Cell Holder ตอ้ งไมม่ ีอะไรอยใู่ นน้นั (5) เปิ ดฝา Sample compartment โดยที่ตอ้ งใหแ้ สงจากหลอดไฟในหอ้ งส่องถงึ Sample compartment (6) คล๊ิก Start (7) ตรวจสอบ Peak Pick ตอ้ งไดค้ ่า EM ที่ 435.8 ± 1.5 nm ในกรณีท่ี ไม่ได้ค่าตามที่กาหนด ติดต่อ Shimadzu หรือ ตัวแทนจาหน่าย 20

2.2. Wavelength Accuracy for Emission Monochromator (1) เลอื ก Mode Spectrum (2) ใส่ น้า DI ลงใน Cell Holder แลว้ ปิ ดฝา Sample compartment ใหส้ นิท (3) ขา้ เมนู Configure > Instrument เลอื ก ON \"PMT Protect\" และ \"-HV Control\" (4) ต้งั ค่า Parameter ดงั ภาพ (5) กด Start (6) ตรวจสอบ Peak Pick ตอ้ งไดค้ ่าไกลเ้ คียงกบั ค่า EM Accuracy 21

2.3. การทา Signal to Noise Ratio ในหวั ขอ้ Signal to Noise Ratio จะทาในกรณีที่ มกี ารติดต้งั Xe lamp ใหมท่ ุกคร้ังและสามารถ ทาการตรวจเชค็ ในหวั ขอ้ น้ีเป็นประจาซ่ึงสามารถทาไดอ้ ยา่ งง่ายดาย เพราะในหวั ขอ้ น้ีจะมี โปรแกรมสาเร็จรูปมาอยแู ลว้ ข้นั ตอนการตรวจเชค็ ดงั น้ี (1) เปิ ดสวิตซเ์ ครื่อง และเปิ ดสวิตซ์ Xe Lamp ก่อนทาการตรวจเชค็ อยา่ งนอ้ ย 30 นาที (2) เขา้ เมนู Configure > Instrument เลือก Perform S/N Ratio (3) จากน้นั จะเขา้ ส่ขู ้นั ตอนการตรวจเชค็ ใหป้ ฏิบตั ิตามคาสง่ั ต่างๆของโปรแกรม (4) เมอ่ื เจอคาสงั่ ดงั ภาพ ใหใ้ ส่น้า DI ลงใน Cell Holder ปิ ดฝาใหส้ นิท (5) จากน้นั กด OK (6) เครื่องจะทาการทดสอบเองอตั โนมตั จะใชเ้ วลาประมาณ 10 นาที (7) ตรวจสอบค่าท่ีได้ Peak Height ควรจะได้ 10 ± 2 S/N Ratio ตอ้ งมากกวา่ 150 ซ่ีงค่าดงั กล่าวเป็นมารตฐานของ ทาง ผผู้ ลิต 22