Sheet การสกัดดีเอ็นเอ

การสกดั ดเี อน็ เอจากมะเขือเทศ

ดีเอน็ เอ คือโมเลกลุ ที่ทาหนา้ ท่ีเกบ็ รหสั ทางพนั ธุกรรม ของส่ิงมีชีวิต 3

ข้นั ตอนการสกดั ดเี อน็ เอจากมะเขือเทศ 1. หน่ั มะเขือเทศเป็นชิ้นเลก็ ๆ แลว้ เทใส่ในบีกเกอร ขนาด 500 มิลลิลิตร ข้นั ตอนน้ีเป็นการทาใหเ้ ซลลมะเขือเทศมีพ้นื ท่ีผวิ สัมผสั กบั สารท่ีจะนามาสกดั ดีเอน็ เอมากข้ึน 4

2. เตรียมสารละลายน้ายาลา้ งจาน 100 ml ✓เติมน้าประมาณ 50 มิลลิลิตร ลงในบีกเกอรขนาด 250 มิลลิลิตร ✓เติมเกลือแกงประมาณ 1 ชอ้ น คนจนละลาย ✓จากน้นั เติมน้ายาลา้ งจา้ งลงไปประมาณ 3 ชอ้ น ✓เติมน้าจนไดป้ ริมาตรรวม 100 มิลลิลิตร ✓ใชแ้ ท่งแกว้ คนชา้ ๆ ใหส้ ารละลายเป็นเน้ือเดียวกนั พยายามอยา่ ใหเ้ ป็นฟอง 5

3. เทสารละลายน้ายาลา้ งจานท่ีเตรียมไดใ้ นขอ้ 2. ลงใน บีกเกอรท่ีบรรจุมะเขือเทศหน่ั และนาบีกเกอรน้นั ไปแช่ใน อา่ งควบคุมอุณหภูมิท่ี 60 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 2 นาที 60C 6

เกิดอะไรข้ึนกบั มะเขือเทศ ในข้นั ตอนที่ 2 และ 3 ? 7

น้ายาลา้ งจานจะไปช่วยทาใหเ้ ซลลมะเขือเทศแตกออก โดยจะทาลายท้งั เยอื่ หุม้ เซลลและเยอื่ หุม้ นิวเคลียสของมะเขือเทศ ส่งผลใหด้ ีเอน็ เอถูกปลดปล่อยออกมาอยใู่ นสารละลาย 8

ส่วนเกลือแกง (NaCl) น้นั Na+ จะเขา้ ไปจบั กบั หมู่ฟอสเฟตของดีเอน็ เอซ่ึงมี ประจุเป็นลบ และทาใหส้ ายดีเอน็ เอเกาะ กลุม่ กนั และไม่สามารถละลายน้าได้ 9

ความร้อนที่ 60 องศาเซลเซียส ช่วยยบั ย้งั การทางานของเอนไซม Dnase ซ่ึง เป็นตวั ทาใหส้ ายดีเอน็ ถูกตดั เป็นสายส้ันๆ หมายเหตุ: หา้ มทิ้งสารสกดั มะเขือเทศ ไวใ้ นความร้อน นานเกินไป เพราะสาย ดีเอน็ เอจะคลายเกลียวแยกออกจาก กนั 10

4. ยา้ ยบีกเกอรจากอ่างควบคุมอุณหภูมิไปแช่ในกระบะน้าแขง็ ทนั ที เป็นเวลา 2 นาที ข้นั ตอนการทาใหเ้ ยน็ เป็นการหยดุ การคลายเกลียวดีเอน็ เอ 11

5. กรองของเหลวในบีกเกอรดว้ ยผา้ ขาวบางลงในบีกเกอรใบใหม(่ ทาในกระบะ น้าแขง็ ) ข้นั ตอนน้ีเป็นการกาจดั เศษมะเขือเทศที่มีขนาดใหญ่ออกไป กรองดว้ ยผา้ ขาวบาง 12

6.นาของเหลวท่ีกรองไดไ้ ปเติมสารหมกั เน้ือ แลว้ คนเบาๆ สารหมกั เน้ือมีเอนไซม papain ซ่ึงจะช่วย กาจดั โปรตีนท่ีติดมากบั สารสกดั มะเขือเทศ ซ่ึงรวมถึงการกาจดั โปรตีนพวกฮีสโตนดว้ ย ส่งผลให้ ดีเอน็ เอท่ีสกดั ไดม้ ีความบริสุทธ์ิ มากข้ึน 13

7. จากน้นั เทสารสกดั มะเขือเทศลงในหลอดทดลองประมาณ 1/3 ของหลอด แลว้ ใชป้ ิ เปตดูด 95% เอทานอลเยน็ 5 มิลลิลิตร แลว้ เติมลงในหลอดทดลอง โดยใหป้ ลายปิ เปต แตะขา้ งๆ หลอด แลว้ ปลอ่ ยเอทานอลลงไปชา้ ๆ เพื่อใหเ้ กิดช้นั ของแอลกอฮอลดา้ นบน ของสารสกดั มะเขือเทศ(หา้ มเขยา่ ) 14

ภายหลงั จากทิ้งไว้ 2-3 นาที จะเห็นสายดีเอน็ เอเป็นเมือกสีขาวลอยอยทู่ างดา้ นบน ของช้นั แอลกอฮอล แอลกอฮอลจะช่วยส่งเสริมใหก้ ารจบั กนั ระหวา่ ง Na+ และหมู่ฟอสเฟตของดีเอน็ เอดีข้ึนโดยช่วยขวางก้นั การจบั กนั ระหวา่ งน้ากบั Na+ ส่งผลใหด้ ีเอน็ เอเกาะกลุ่มกนั ใหญ่ข้ึนและลอยข้ึนมาใหเ้ ห็นชดั ในช้นั แอลกอฮอล 15

นกั เรียนไดด้ ีเอน็ เอแบบน้ีหรือไม่คะ ??? 16