DOSSIE_TECNICO_BRAVECTO

Dossiê Técnico 1

Dossiê Técnico

SumárioEstudo de campo controlado, randomizado e cego, para avaliar o uso de comprimidos4de fluralaner no controle da infestação de pulgas em cães nos EUA...................................Fluralaner, uma nova isoxazolina, previne a reprodução de pulgas12Ctenocephalides felis in vitro e em ambiente doméstico simulado..................................Segurança do tratamento simultâneo com BravectoTM (fluralaner) e coleira18ScaliborTM (deltametrina) em cães.....................................................................................Segurança dos comprimidos mastigáveis de fluralaner (BravectoTM), uma nova20droga antiparasitária sistêmica, após administração por via oral em cães......................Farmacocinética do fluralaner em cães após administração única27por via oral ou intravenosa................................................................................................Segurança do fluralaner, uma nova droga antiparasitária sistêmica,32em Collies MDR1(-/-) após administração por via oral.....................................................O efeito do alimento na farmacocinética do fluralaner administrado35por via oral em cães...........................................................................................................Estudo de campo randomizado e cego, controlado e multicêntrico comparandoa eficácia e segurança do BravectoTM (fluralaner) com o FrontlineTM (fipronil)39em cães infestados por pulgas e carrapatos......................................................................Resistência de pulgas e carrapatos a inseticidas/acaricidas em infestações44de cães e gatos...................................................................................................................Início de ação do fluralaner (BravectoTM) contra pulgas54Ctenocephalides felis em cães............................................................................................Segurança do tratamento simultâneo de cães com fluralaner58(BravectoTM) e milbemicina oxima – praziquantel.............................................................Velocidade de eliminação do carrapato Ixodes ricinus pelo61fluralaner (BravectoTM) em cães.........................................................................................http://www.parasitesandvectors.com/series/bravecto

Meadows et al. Parasites & Vectors 2014, 7:375http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/375PESQUISA Acesso AbertoEstudo de campo controlado, randomizado e cego, para avaliar ouso de comprimidos de fluralaner no controle da infestação depulgas em cães nos EUACheyney Meadows*, Frank Guerino e Fangshi SunResumoHistórico: O fluralaner, uma nova molécula isoxazolínica, fornece 12 semanas de proteção contra pulgas e carrapatos,de acordo com a descrição do rótulo.Método: Esse estudo multicêntrico e cego para os proprietários de cães avaliou o controle de pulgas fornecido poruma única dose administrada por via oral de fluralaner (25–56 mg/kg; Bravecto™, MSD Saúde Animal) comparado aum grupo controle para o qual foram administrados três tratamentos de spinosad via oral (30 – 60 mg/kg; Comfortis®,Elanco) no intervalo de 4 semanas junto com uma coleira de amitraz (9%, Preventic®, Virbac). As famílias foramselecionadas aleatoriamente (proporção 3:1) tanto para o fluralaner (224 cães, 118 famílias) como para o controle (70cães, 39 famílias). Em cada família, um cão com pelo menos 10 pulgas vivas na triagem foi aleatoriamente selecionadopara contagem de corpo inteiro de pulgas a cada 4 semanas até a semana 12; todos os cães foram acompanhadosquanto à segurança até a semana 12. Os cães cujo tratamento foi feito com fluralaner receberam duas dosesadicionais nas semanas 12 e 24 para garantia de segurança e observação de palatabilidade até a semana 26.Resultados: As médias geométricas da redução de contagem de pulgas de referência para o grupo fluralaner nassemanas 4, 8 e 12 foram 99,7%, 99,8%, e 99,8%, respectivamente; e 96,1%, 99,5%, e 99,6% para os controles comspinosad. As porcentagens de cães primários isentos de pulgas nas semanas 4, 8 e 12 foram 91,1%, 95,4%, e 95,3%para o grupo fluralaner; e 44,7%, 88,2%, e 84,4% para os controles; as diferenças foram significativas nas semanas 4 (P< 0,0001) e 12 (P = 0,0370). A melhora da Dermatite Alérgica por Picada de Pulga (DAPP) foi observada em ambos osgrupos. Os comprimidos de fluralaner foram aceitos por espontânea vontade em mais de 90% das doses. O eventoadverso mais comum foi o vômito, ocorrendo em 7,1% do grupo de fluralaner e 14,3% dos controles. Não foi relatadonenhum evento adverso grave relacionado ao tratamento.Conclusões: O tratamento de cães com um só comprimido mastigável palatável aromatizado de fluralaner fornece umaopção segura e eficaz no controle de pulgas por 12 semanas, equivalente a pelo menos 3 tratamentos sequenciais comcomprimidos de spinosad. Aliado ao alto nível de controle de pulgas ocorreu um alívio substancial dos sinais da DAPP.Palavras-chave: Fluralaner, Pulgas, Spinosad, Eficácia, Segurança, Estudo de CampoHistórico Como resultado, a necessidade de aplicaçãoNas últimas três décadas foram observados avanços concomitante de produtos químicos para o ambientesignificativos no tratamento e controle dos ectoparasitas foi amplamente eliminada [2]. Entretanto, essescaninos. Pesticidas tópicos como o imidacloprid e o fipronil avanços no controle tópico de ectoparasitasforam introduzidos nos anos 1990 e forneceram um apresentaram limitações, incluindo a necessidade deconveniente controle mensal antipulgas e, para o fipronil, uma aplicação cuidadosa (e, às vezes, desafiadora)atividade adicional contra um amplo leque de espécies de pelos proprietários, redução da eficácia como resultadocarrapatos [1]. O uso de tais produtos, aplicados topicamente, da dissolução pelo enxágue do banho ou contato com atornou-se rotina na prática de saúde preventiva veterinária. água, e a apreensão dos proprietários com relação àEsses produtos (e outros que foram introduzidos mais tarde), exposição ao ambiente doméstico [3]. Em 2007, umtanto de uso isolado quanto associado a outras moléculas, pulicida administrado por via oral (spinosad,reduziram ou eliminaram as infestações de pulgas e, no Comfortis, Elanco) foi lançado, fornecendo uma viatratamento mensal subsequente, eliminaram a maioria das alternativa na eliminação de pulgas pelo período de umreinfestações antes que a fase de oviposição tivesse início. mês após o tratamento [4]. Enquanto o spinosad administrado por via oral sanou a preocupação*Contato: [email protected] relacionada quanto aos produtos tópicos, tambémMerck Animal Health, Summit, NJ, USA falhou na eficácia contra carrapatos e manteve a necessidade de aplicação mensal.44 © 2014 Wengenmayer et al.; licenciado por BioMed Central Ltd. Este é um artigo de acesso livre distribuíd sob os termos da Licença Atribuída a Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0), que permite o uso, distribuição e reprodução irrestrita em qualquer meio, desde que o trabalho original seja devidamente creditado. A dispensa da dedicatória ao domínio público da Creative Commons (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) aplica-se aos dados disponibilizados neste artigo, salvo indicação em contrário.

Meadows et al. Parasites & Vectors 2014, 7:375http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/375 Fluralaner é uma nova isoxazolina inseticida/acaricida Envolvendo Animais, e foi revisado e aprovado porque oferece o mais recente avanço no controle de um comitê de ética. Um consentimento por escrito foiectoparasitas de cães, com 12 semanas de ação contra obtido de cada proprietário de cão antes do início depulgas e carrapatos através de uma única dose qualquer atividade. O estudo foi conduzido de agostoadministrada por via oral. Esse tratamento demonstrou de 2011 até junho de 2012 em 18 clínicas veterináriasser, em um estudo de campo multicêntrico na Europa, situadas em nove estados diferentes – Alabama,superior a três doses sequenciais de fipronil para o Flórida, Kansas, Louisiana, Maine, Missouri,controle de pulgas e também eficaz no controle de Carolina do Norte, Pensilvânia e Texas. Em cadacarrapatos [5]. local, o avaliador era o veterinário clínico, responsável pela supervisão do protocolo, O Bravecto™ (13,64% m/m de comprimido comunicação com o proprietário, exame físico domastigável palatável de fluralaner, MSD Saúde animal incluindo Dermatite Alérgica por Picada deAnimal) é o primeiro produto cuja formulação com Pulga (DAPP) e supervisão da contagem de pulgas.fluralaner foi aprovado pela FDA-USA (NADA 141- Para manter o estudo cego, cada produto antipulgas426) e que fornece 12 semanas de proteção contra as foi atribuído a um dado cão por uma equipe cujopulgas e de 8 a 12 semanas contra os 4 gêneros mais treinamento foi não-cego, que foi instruída para nãocomuns de carrapatos nos Estados Unidos (Ixodes, participar dos dados de coleta de pulgas, exameDermacentor e Rhipicephalus, Amblyomma) na físico, ou avaliação da DAPP. Essa equipe tambémdosagem mínima recomendada de 25 mg/kg. Após a foi responsável por quaisquer mensurações adicionaisadministração por via oral em cães, seguida ou não de necessárias para garantir o cegamento do estudo,alimento, o fluralaner é rapidamente absorvido, e como a remoção da coleira de amitraz em cães dofornece 100% de eficácia contra pulgas e carrapatos grupo controle antes que fossem examinados pelaIxodes ricinus dentro de 1 dia após o tratamento equipe cega. As coleiras foram recolocadas pelos[6,7]. Os níveis sanguíneos são então mantidos e proprietários ou pela equipe não-cega após afornecem uma eficácia de >95% contra pulgas e completa execução das atividades cegas.carrapatos por mais de 12 semanas [6,7]. A segurançafoi demonstrada em filhotes após repetidas Seleção e participaçãoadministrações de mais de 280 mg/kg (cinco vezes adose recomendada) em intervalos de 8 semanas, com As famílias selecionadas podiam ter mais de 5 cães,início às 8 semanas de idade, e em Collies sensíveis à todos eles com pelo menos mais de 12 semanas deivermectina, doses 3 vezes maiores do que a idade, pesando pelo menos 2 kg (4,4 lb) e que tivessempermitida [8,9]. boa saúde em geral. Entretanto, cães que sofressem de doenças crônicas (p.ex., endocrinopatias, doenças O atual estudo de campo foi conduzido nos cardiovasculares, convulsões) poderiam participar casoEstados Unidos para comprovar a eficácia de além de a doença estivesse estabilizada antes da adesão no12 semanas (84 dias) de uma dose única do estudo. Não havia restrição de raça ou sexo, mascomprimido mastigável palatável de fluralaner para famílias que tivessem cães prenhes ou lactantes nãotratamento e controle da infestação de pulgas. Esses poderiam ser eleitas. Famílias cujos cães estivessemresultados foram comparados àqueles do grupo expostos a animais de estimação não confinados (quecontrole tratado com spinosad e coleira de amitraz. A não cães), que pudessem hospedar pulgas (p.ex., gatos)evidência de Dermatite Alérgica por Picada de Pulga não foram eleitas. De modo semelhante, não foram(DAPP) não foi o critério de avaliação principal, mas eleitas famílias cujo segundo cão não estivesse dentroum objetivo secundário verificado com a melhora de dos critérios de seleção.sinais básicos de DAPP em um subconjunto de cãesque apresentavam sinais de DAPP. Além disso, a A contagem de pulgas por varredura do corpo inteirosegurança e a palatabilidade de comprimidos de por, no mínimo, 15 minutos de duração por cão, foi feitafluralaner foram avaliadas por 26 semanas (182 dias) em todos os cães por um indivíduo cego para oem cães que receberam dois tratamentos adicionais tratamento proposto. O critério para a seleção dasem um intervalo de 12 semanas. A avaliação do famílias era o de que pelo menos um cão em cada famíliacontrole de carrapatos fornecida por cada estudo estivesse infestado com um mínimo de 10 pulgas vivastambém foi realizada. no momento da avaliação.Métodos Os seguintes sinais de DAPP foram avaliadosEsse estudo cego para o pesquisador, multicêntrico, separadamente por um veterinário cego para o estudocontrole positivo, foi realizado para avaliar a eficácia (Sem Sintoma, Leve, Moderado ou Severo): eritemado controle de pulgas após a administração de [10,11], alopecia [11], pápulas [10,11], escamas [10],comprimidos de fluralaner por proprietários de cães crostas [10] e escoriações [11]. Quando presente (i.e.,infestados por pulgas. Comparações foram feitas com Leve, Moderado ou Severo), cada sintoma foi avaliadoum grupo controle que recebeu três tratamentos posteriormente pelo veterinário cego levando-se em contasequenciais de spinosad administrados via oral em a localização anatômica e presença ou não de sinaisintervalos de 4 semanas associado à coleira de indicativos de DAPP. Não havia definição de protocoloamitraz. O protocolo de estudo foi executado através de DAPP, e o veterinário usou sua experiência ede Boas Práticas Clínicas (VICH GL9), Princípios de conhecimento para determinar se os sinais eramConduta Internacional para Pesquisa Biomédica indicativos de DAPP. Evidências de DAPP não foram utilizadas como critério para seleção ou randomização. 55

Meadows et al. Parasites & Vectors 2014, 7:375http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/375 As restrições de seleção quanto ao uso anterior de causava a queda de pulgas e cuja atividade pulicida eramedicamentos e tratamentos antipulgas foram baseadas de um mês. Esse produto não possui descrição dena informação do rótulo do produto. Os produtos cujo atividade contra carrapatos e nem tinha registro norótulo indicava uso mensal tinham um efeito de FDA quanto à eficácia contra uma ampla gama deenxágue/washout mínimo de 30 dias, rótulos de carrapatos. Como o controle de carrapatos poderia serprodutos cujo uso era de duas semanas tinham um necessário em algumas áreas selecionadas, nósefeito de enxágue de 14 dias, e rótulos de produtos de fornecemos uma coleira de amitraz devido à suauso semanal tinham um efeito de enxágue de 7 dias. reconhecida eficácia contra carrapatos e ausência deTratamentos que pudessem afetar a avaliação de sinais efeito em pulgas.de DAPP (por exemplo, esteroides, anti-histamínicos,cremes, pomadas, banhos etc.) foram permitidos, mas Cada local tinha sua própria tabela dequalquer dado de DAPP coletado após o tratamento do randomização para inscrição de famílias no grupo decão com tal produto foi excluído do sumário e da tratamento; todos os cães de uma mesma famíliaanálise dos dados de DAPP. receberam o mesmo tratamento. As tabelas de randomização também incluíam um esquema de Nenhum outro tratamento simultâneo para seleção randômica de cães primários em famílias queinfestação de pulgas ou carrapatos foi permitido possuíssem mais de 1 cão com ≥ 10 pulgas vivas nodurante o período de estudo. Tosa, banho, nado ou momento do recrutamento. O cão primário foi tratadooutras atividades aquáticas foram permitidas durante o de maneira idêntica aos outros cães, exceto pelo fatoestudo, embora tenha sido pedido aos proprietários de de que foi o único cão da família no qual a contagemcães participantes que removessem a coleira de amitraz de pulgas foi realizada para avaliação de eficácia nastemporariamente durante o contato com a água. Banho visitas 2, 3 e 4.e tosa não foram permitidos nas 72 horas anteriores àcontagem de pulgas, programada pelo protocolo, para O fluralaner foi administrado segundo asevitar qualquer impacto sobre as pulgas vivas. orientações da bula (25 – 56 mg/kg). Proprietários foram instruídos para administrar o tratamento na hora Para avaliar a palatabilidade dos comprimidos de da refeição, imediatamente antes de fornecer ofluralaner, os proprietários foram instruídos a oferecer alimento. Doses adicionais de comprimidos dea dose primeiramente com as próprias mãos ou em fluralaner foram fornecidas nas semanas 12 e 24 deuma tigela. O proprietário anotou se a dose foi acordo com o peso corpóreo do cão nessas visitas.voluntariamente aceita dentro de 1 minuto ou dentro Cães do grupo controle receberam uma coleirade 1-5 minutos. Caso contrário, o proprietário poderia carrapaticida de amitraz a 9% mais comprimidos detomar medidas alternativas para administrar a dose ao spinosad na dosagem de 30 a 60 mg/kg de pesocão, como esconder os comprimidos em comidas ou corporal segundo a bula. Os comprimidos de spinosadpetiscos. Caso esses métodos falhassem, então o foram também fornecidos nas semanas 4 e 8 de acordoproprietário poderia forçar a administração do com a mensuração do peso do cão nas respectivascomprimido ou contatar o pesquisador. A semanas. A primeira administração do tratamentopalatabilidade dos comprimidos de spinosad não foi proposto para qualquer cão da família, que ocorreu noavaliada. dia ou imediatamente após a primeira visita, foi classificada como dia 0. Os proprietários foram instruídos para monitorarcães durante uma hora após a administração e a Justificativa de tamanho amostralficarem alertas para qualquer evidência de vômitos, O cálculo do tamanho amostral baseou-se na reduçãotosse, engasgos, ânsia de vômito, salivação, presença significativa da contagem de pulgas desde a avaliaçãode baba ou outros efeitos adversos. O proprietário foi inicial, em cada marcação de tempo. Utilizando osinstruído para contatar a clínica caso o cão vomitasse dados de estudos controlados anteriores queou regurgitasse o comprimido dentro de 1 hora após a demonstravam a eficácia do fluralaner contra pulgas,administração; nesse caso receberia uma dose extra. calculamos que não mais de 10 famílias seriam suficientes para fornecer 80% da força necessária paraRandomização e tratamento demonstrar uma redução estatisticamente significanteEm cada local de estudo, as famílias escolhidas foram (p < 0,05) da contagem de pulgas em nível basal. Paraconduzidas aleatoriamente a um grupo de tratamento, garantir uma inclusão regional ampla de famílias ede acordo com o delineamento randomizado em bloco, cães, o estudo objetivou o recrutamento de 100sendo o tempo de entrada no projeto o fator de famílias no grupo de tratamento com fluralaner e 33blocagem. Dentro de cada bloco, os cães foram famílias no grupo controle (spinosad + amitraz). Oaleatoriamente distribuídos a uma razão de 3:1, tanto recrutamento na razão de 3:1 forneceu ao grupopara o grupo fluralaner como para o grupo controle de controle famílias suficientes para referência espinosad + amitraz. Devido à evidência de que a comparação, ao passo que também aumentou ainfestação de pulgas fosse um critério de escolha e à oportunidade para realizar observações de segurançaexistência de numerosos produtos aprovados para o no pós-tratamento do grupo fluralaner.controle de pulgas, nós decidimos não utilizar umgrupo controle negativo. O spinosad disponívelcomercialmente foi escolhido como controle positivo,pois no início do estudo esse era o único produtoadministrado por via oral aprovado pelo FDA que66

Meadows et al. Parasites & Vectors 2014, 7:375http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/375Avaliações de eficácia O modelo de mínimos quadrados foi utilizado para comparação e foi retransformado para obtermos asTodos os cães do estudo fizeram retornos periódicos ao estimativas de contagem da média geométrica de pulgas.local de estudo para avaliação a cada 4 semanas, do dia 0 Um ajuste Kenward-Rogers foi utilizado para determinar osao 84, com uma janela ± 2 dias na visita da semana 4 e ± 3 graus de liberdade do denominador para o teste de hipóteses.dias nas visitas subsequentes. Todos os locais foramtreinados quanto aos procedimentos de avaliação do Foram conduzidas comparações dentro de cada grupoestudo. O cegamento de qualquer membro da equipe de tratamento entre a contagem no pré-tratamento e nosenvolvido na avaliação do estudo foi mantido pela dias 28, 56 e 84 assim como entre os grupos depresença de um indivíduo não-cego (tanto o proprietário do tratamento nos dias 28, 56 e 84. Um teste bilateral foicão quanto um membro não-cego da equipe clínica) que utilizado para cada comparação no nível de significânciaremovia a coleira carrapaticida dos cães-controle antes que de α = 0,05. A análise estatística foi feita com o softwarese executasse a contagem de pulgas, avaliação de DAPP, SAS (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA, versão 9.3).ou exame físico. Não era permitida a execução de tarefasdo estudo que necessitassem cegamento (contagem de O tratamento foi considerado eficaz em cada marcaçãopulgas, avaliação de DAPP, exame físico) por indivíduos de tempo caso a redução média na contagem de pulgasnão-cegos. A contagem de pulgas de corpo inteiro foi vivas fosse 90% ou mais em comparação ao dia 0 e asexecutada através do uso de uma escova especial por pelo contagens médias nos dias 28, 56 e 84 resultaram em umamenos 15 minutos. Se pulgas fossem retiradas durante o diferença estatisticamente significante (P ≤ 0,05) no dia 0 eúltimo minuto do procedimento, a escovação seria mantida inferior ao dia 0. As porcentagens de cães primários livrespor 5 minutos adicionais até que nenhuma pulga fosse de pulgas (aqueles com 0 pulgas) nos dias 28, 56 e 84retirada. Todas as pulgas vivas foram contadas. Membros (semanas 4, 8 e 12) foram comparadas entre os grupos deda equipe de cada local também foram treinados para tratamento com fluralaner e spinosad+amitraz utilizandoprocurar manualmente por carrapatos utilizando-se um um teste bilateral com nível de significância α = 0,05. Umaexame de corpo inteiro cuja duração era de 5 minutos. abordagem assintótica não-paramétrica foi utilizada paraDurante o estudo, todo carrapato aderido, coletado durante obter as estimativas para as diferenças de porcentagensas visitas clínicas ou por proprietários no intervalo entre as entre os grupos de tratamento. StatXact v9 foi utilizadovisitas, foi imerso em frascos selados contendo álcool para para elaborar o resumo e a análise. Todos os cãesposterior identificação por um parasitologista. Dados de envolvidos e tratados foram incluídos na análise decoleta de carrapatos foram fiscalizados, e nenhum dos segurança clínica. Dados de coleta de carrapatos foramprodutos envolvidos no estudo foi avaliado quanto à sua observacionais e nenhum produto do estudo foi avaliadoeficácia contra carrapatos. Pulgas e carrapatos foram quanto à eficácia contra carrapatos.contados em cães primários em todas as visitas (semanas 0,4, 8 e 12). Para cães não-primários, o protocolo limitou Foram avaliados sinais de DAPP para todos os cãesessas avaliações para a visita de adesão. do estudo em cada visita clínica. A avaliação foi conduzida por um veterinário cego, avaliando-se a O critério de eficácia principal foi baseado na severidade (Sem Sintoma, Leve, Moderado ou Severo) econtagem de pulgas vivas em cães primários na a localização anatômica dos seguintes sinais clínicos deunidade experimental nas semanas 4, 8 e 12 (dias 28, DAPP: eritema, alopecia, pápulas, escamas, crostas e56 e 84) comparado ao padrão de contagem. Para escoriação. Caso um sintoma estivesse presente, oavaliação de outras variáveis (segurança/efeitos veterinário também anotava se fosse indicativo deadversos, avaliação da DAPP, contagem e DAPP. Finalmente, foi registrado se o cão recebesseidentificação de carrapatos, palatabilidade dos qualquer medicação (p.ex., esteroides, anti-histamínicoscomprimidos de fluralaner mastigáveis aromatizados), etc.) que pudessem afetar a avaliação da DAPP. Acada cão foi a unidade experimental. presença de sinais de DAPP em cães que não tivessem recebido quaisquer medicações interferentes foi A média geométrica da contagem de pulgas vivas nos registrada para ambos os grupos de tratamento. Foicães primários foi calculada separadamente para os cães registrada, para cada sintoma de DAPP, a porcentagemfluralaner e controles, para cada marcação de tempo (dias de cães cujo sintoma no recrutamento (Leve, Moderado28, 56 e 84). A redução de porcentagem em cada marcação ou Severo) resultasse na recuperação completa (Semde tempo foi calculada de acordo com a equação: Sintoma) na semana 12, desde que não fossem usadas quaisquer medicações interferentes.ܲ‫ܽ݅ܿž݂ܿ݅݁݁݀݉݁݃ܽݐ݊݁ܿݎ݋‬ ൌ  ൬ͳ െ ‫ܦ‬௫ ൰ ͳͲͲ ‫ܦ‬଴ Avaliações de segurança Todos os cães do presente estudo foram monitorados atéOnde D0 = média geométrica inicial e Dx = média a semana 12 (dia 84) quanto a avaliações de segurança,geométrica no dia x (x = 28, 56 ou 84). incluindo visitas clínicas a cada 4 semanas. Cães tratados com fluralaner foram monitorados até a semana 26, Os dados de contagem da média geométrica de pulgas incluindo visitas clínicas a cada 4 semanas desde aforam transformados antes de qualquer análise através da semana 12 até a semana 24 e uma visita final na semanaequação Y = loge(x + 1). Os dados transformados por 26, 2 semanas após a dose final de fluralaner. Oslogaritmo foram analisados por um modelo linear misto, proprietários foram instruídos para monitorarcom mensurações repetidas, incluindo tratamento, visita e cuidadosamente cada cão após a administração dovisita*tratamento como fatores fixos e o local como fator tratamento, e para observar possíveis efeitos adversos quealeatório, sendo os cães primários o objeto repetido. pudessem ocorrer a qualquer momento durante o curso do 77

Meadows et al. Parasites & Vectors 2014, 7:375http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/375estudo. Os proprietários foram orientados para Um cão não-primário do grupo fluralaner foi retirado dodocumentar qualquer evento desfavorável ou não estudo a pedido do proprietário, pois apresentou vômito logointencional (ou qualquer outra observação que julgassem após o primeiro tratamento; os outros dois cães da famíliaconveniente) em um diário de estudo, incluindo permaneceram no estudo. Todas as outras saídas foramcarrapatos aderidos. consideradas não-relacionadas ao tratamento mas relacionadas a diversas outras razões incluindo erro de dispensação, não- Sangue e urina de todos os cães-controle foram coletados cegamento, violações de protocolo incluindo falha no retornono início (dia 0) e na semana 12 (dia 84). Sangue e urina de das visitas agendadas, e duas mortes – um cão morreutodos os cães tratados com fluralaner foram coletados no atropelado por um carro, e outro cão foi eutanasiado apósinício (dia 0), na semana 12 e na semana 26. Amostras foram complicações no quadro pré-existente de falência cardíaca.submetidas para avaliação clínico-patológica (hemogramacompleto, bioquímica sérica, incluindo função renal e hepática As contagens de pulgas pré-tratamento forame urinálise) para determinação de qualquer efeito adverso do semelhantes nos grupos de tratamento inscritos (Tabelatratamento em potencial. 2). Em ambos os grupos de tratamento, a contagem de pulgas dos cães primários foi significativamenteResultados reduzida (P < 0,0001 e ≥ 90% de eficácia) emDuzentos e noventa e quatro cães (294) de 157 famílias comparação à avaliação inicial em cada medida deforam inscritos entre agosto de 2011 e dezembro de tempo (Tabela 2). A porcentagem de cães primários2011 em 18 locais de estudo, com 118 cães primários livres de pulgas no grupo fluralaner foiselecionados para receber fluralaner (com um adicional significativamente diferente daquele spinosad + amitrazde 106 cães contactantes das mesmas famílias) e 39 cães nos dias 28 e 84 (valores de P <0,0001 e =0,0370,primários selecionados para receber spinosad + amitraz respectivamente); mas não foi significativamente(com um adicional de 31 cães contactantes das mesmas diferente no dia 56 (valor de P =0,1364).famílias). Os cães permaneceram no estudo até junho de2012. Aproximadamente 50% (56/118 fluralaner e Nenhum efeito adverso maior foi relatado tanto no19/39 controles) das famílias envolvidas em cada grupo grupo fluralaner quanto no grupo spinosad + amitraz.possuíam um único cão. Idade, sexo e peso dos dois O evento adverso mais comum em cada grupo foi agrupos de tratamento foram equilibrados (Tabela 1). emese, relatada em maior porcentagem no grupoAproximadamente um terço dos cães em cada grupo spinosad + amitraz do que no grupo fluralaner (Tabelaforam descritos como raça mista, sendo a raça mais 3). Não houve alterações clínicas relevantes nocomum o Chihuahua (6,7% [15/224] do grupo hemograma completo, bioquímica sérica ou urinálisefluralaner; 5,7% [4/70] do grupo spinosad + amitraz), em cada grupo de tratamento.Jack Russell (4,0% [9/224] e 4,3% [3/70]), LabradorRetriever (4,0% [9/224] e 2,9% [2/70]) e Boxer (3,1% No início da avaliação (visita inicial), em locais[7/224] e 4,3% [3/70]). como a Flórida, Missouri, Alabama, Pensilvânia e Louisiana, um total de 47 carrapatos aderidos foi Da população de cães das famílias, 8,0% (18/224) do encontrado em 13 cães inscritos no grupo spinosad +grupo fluralaner (incluindo onze cães primários) e 11,4% amitraz. Na visita 2, de um cão fluralaner foi removido(8/70) do grupo spinosad + amitraz (incluindo três cães um carrapato morto não-ingurgitado e na visita 3, deprimários) não foram incluídos nas avaliações de outro cão fluralaner, foram removidos dois carrapatosresultados completadas no dia 84. (um vivo não-ingurgitado e um morto não- ingurgitado). Na visita 4, foi removido um carrapatoTabela 1. Dados demográficos de cães participantes e vivo não-ingurgitado de um cão controle.distribuição do número de cães em cada família Além dos 62 carrapatos aderidos coletados pelos Fluralaner Spinosad + pesquisadores, 14 carrapatos foram coletados pelos n = 224 Amitraz proprietários e entregues aos pesquisadores. Os 76 carrapatos n = 70 no total foram submetidos à identificação. Nesses locais, os gêneros identificados foram Ixodes (82,9% 63/76] de todos osIdade (anos) Média (SD) 5,1 (3,7) 5,3 (3,7) carrapatos submetidos), Amblyomma (13,2% [10/76]), Dermacentor (2,6% [2/76]) e Rhipicephalus (1,3% [1/76]). Variabilidade 0,2 – 15,0 0,3 – 13,6 A avaliação de palatabilidade de comprimidosPeso (lb) Média (SD) 37,3 (29,16) 38,7 (26,25) mastigáveis aromatizados de fluralaner realizada pelos proprietários foi disponibilizada para 559 de 621 doses Variabilidade 4,4 – 152,0 4,6 – 83,6 administradas durante o curso de estudo. A palatabilidade foi consistente através das três dosesSexo Fêmea, intacta 33 (14,7%) 14 (20,0%) (Tabela 4). Aproximadamente 80% (451/559) das doses de fluralaner foram aceitas por espontânea Fêmea, castrada 82 (36,6%) 24 (34,3%) vontade dentro de 5 minutos após serem oferecidas e adicionais 12,5% (70/559) foram consumidos com Macho, intacto 53 (23,7%) 9 (12,9%) alimento ou outro petisco. Macho, castrado 56 (25,0%) 23 (32,9%)Distribuição de tamanho nas famílias (número de cães) 1 56/118 (47,5%) 19/39(48,7%) 2 32/118 (27,1%) 12/39(30,8%) 3 21/118 (17,8%) 6/39 (15,4%) 4 4/118 (3,4%) 1/39 (2,6%) 5 5/118 (4,2%) 1/39 (2,6%)88

Meadows et al. Parasites & Vectors 2014, 7:375http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/375Tabela 2. Média geométrica da contagem de pulgas em cães primários, porcentagem de redução desde o início, ecães livres de pulgas (no grupo de tratamento) a cada visita V1 V2 V3 V4 (Início) (Dia 28) (Dia 56) (Dia 84)Número de cães primáriosFluralaner 117 113 108 106Spinosad + Amitraz 39 38 34 32Média geométrica de contagem de pulgas (95% CI)Fluralaner 32,2 (27,1 – 38,2) 0,1 (0 – 0,2) 0,1 (0 – 0,1) 0,1 (0 – 0,1)Spinosad + Amitraz 32,6 (23,6 – 44,9) 1,3 (0,7 – 2,0) 0,2 (0 – 0,4) 0,1 (0 – 0,2)Valor-P para comparação* 0,9469 <0,0001 0,1766 0,2189% eficácia (redução desde o início)Fluralaner NA 99,7% 99,8% 99,8%Spinosad + Amitraz NA 96,1% 99,5% 99,6%% de cães primários livres de pulgasFluralaner NA 91,1% 95,4% 95,3%Spinosad + Amitraz NA 44,7% 88,2% 84,4%Valor-P para comparação** NA <0,0001 0,1364 0,0370“NA” indica que o valor ou cálculo é “não aplicável”. Nenhuma comparação de eficácia foi realizada em V1 e nenhum cão primário estava livre de pulgas em V1.*- Valor-P para estimativas de comparação de significância de modelos de mínimos quadrados**- Valor-P para comparação de porcentagens utilizando-se uma abordagem assintótica não-paramétrica.Portanto, um total de 92,5% das doses de fluralaner foram Esse achado de alta eficácia do fluralaner assemelha-consumidas voluntariamente pelos cães nesse estudo. se ao relato de um estudo europeu, no qual o controle de pulgas, incluindo a porcentagem de cães livres de pulgas A resolução dos sintomas de DAPP desde a adesão ao sob efeito do fluralaner na semana 4 pós-tratamento, foiestudo até a semana 12 (dia 84) de cães que não superior àquele fornecido pelo fipronil tópico/(s)-receberam medicação que pudesse interferir na evolução metoprene [5]. Tal status ‘livre de pulgas’ rapidamenteda DAPP está resumida na Tabela 5. Relativo ao padrão, adquirido pelos cães tratados – e mantido por pelo menosna semana 12 (dia 84) houve um alto nível de resolução 12 semanas – aponta o fluralaner como provedor de umde todos os sintomas de DAPP em ambos os grupos. avanço significativo no tratamento e controle de infestações de pulgas em cães.DiscussãoUma única administração de fluralaner não só forneceu Tal redução na contagem de pulgas e alta taxa deredução na contagem de pulgas equivalente a pelo menos completa eliminação de pulgas dos cães do estudotrês tratamentos mensais consecutivos de spinosad, mas traduziu-se em benefícios clínicos diretos no alívio dostambém resultou significativamente em mais cães livres sintomas de DAPP. Em cada sintoma descrito dede pulgas na semana 4 (fluralaner 91,1% [103/113] vs DAPP, os cães tratados com fluralaner que tinhamspinosad 44,7% [17/38]) e no final da avaliação na sintomas de DAPP no momento da adesão ao estudo esemana 12 (fluralaner 95,3% [101/106] vs spinosad que não tinham interferência de nenhuma outra84,4% [27/32]) após o início do estudo. medicação mostraram melhora de 80% (escamas [16/20]) a 95% (crostas [21/22]). No desenvolvimentoTabela 3. Frequência de eventos adversos relatados em do protocolo, foi decidido que esse registro decães randomizados para receber comprimidos mastigáveis avaliação da DAPP poderia limitar-se àquelearomatizados de fluralaner ou spinosad + amitraz identificado objetivamente pelos pesquisadores.Evento adverso Avaliações subjetivas de prurido relatado pelos Fluralaner, cães Spinosad + Amitraz, proprietários não foram, portanto, completadas. No observados por 26 cães observados por entanto, devido ao prurido e outros sintomas de DAPP semanas ou mais 12 semanas ou mais serem causados pelas picadas de pulgas, e ambos os tratamentos serem eficazes na eliminação de pulgas, N=224 N=70 pode-se esperar que entre os benefícios associados possamos incluir redução no prurido.Emese 16 (7,1%) 10 (14,3%) Esse estudo foi desenvolvido para investigar oDiminuição do apetite 15 (6,7%) 0 (0%) potencial dos comprimidos de fluralaner como uma nova alternativa para controlar infestação de pulgas emDiarreia 11 (4,9%) 2 (2,9%) cães. O estudo foi aberto aos proprietários e à equipe clínica, mas a equipe de avaliação permaneceu cegaLetargia 12 (5,4%) 5 (7,1%) durante todo o tempo.Polidipsia 4 (1,8%) 3 (4,3%)Flatulência 3 (1,3%) 0 (0%) 99

Meadows et al. Parasites & Vectors 2014, 7:375http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/375Tabela 4. Palatabilidade de três tratamentos sequenciais com comprimidos mastigáveis aromatizados de fluralaneradministrados em intervalos de 12 semanasEtapa quando a dose é aceita Porcentagem de doses administradas 1ª Dose 2ª Dose 3ª Dose Total ~D0 ~D84 ~D168 (N=559) (N=164) (N=207) (N=188)Espontânea vontade em 1 minuto 158 (76,3%) 142 (75,5%) 116 (70,7%) 416 (74,4%)Espontânea vontade em 1-5 minutos 11 (5,3%) 15 (8,0%) 9 (5,5%) 35 (6,3%)Escondido no alimento ou outro petisco 27 (13,0%) 17 (9,0%) 26 (15,9%) 70 (12,5%)Alimentação forçada do cão 10 (4,8%) 10 (5,3%) 13 (7,9%) 33 (5,9%)Pesquisador contatado para administrar a dose 1 (0,5%) 4 (2,1%) 0 (0%) 5 (0,9%) As únicas instruções de tratamento fornecidas aos de fluralaner durante o período de observação de 26proprietários foram: administrar os comprimidos semanas (3 doses) e em 14,3% [10/70] dos cães do grupoantes das refeições e seguir as instruções do rótulo, controle durante o período de observação de 12 semanascom uma diferença de protocolo entre tratamentos (3 doses de spinosad). Em outros estudos de campo comrelacionada ao registro de palatabilidade do fluralaner produtos antiparasitários para cães, a taxa de vômitosmastigável. Dois estudos similares com spinosad, dos variou substancialmente – taxas tão altas quanto 18% equais somente um avaliou a palatabilidade (de 15% foram relatadas após o tratamento administrado pormaneira similar ao nosso protocolo), produziram via oral de cães com comprimidos de ivermectina eresultados de eficácia extraordinariamente comprimidos mastigáveis de ivermectina,significativos [3,12]. Os resultados desses estudos respectivamente, e uma taxa de emese de 12% foisão consistentes com os resultados que relatamos, registrada após uma única dose tópica de selamectina ouindicando que avaliações de palatabilidade não dose administrada por via oral de spinosad [12,14,15].alteraram os resultados de maneira nenhuma. Outros eventos adversos foram tipicamente Na visita de inscrição, foram encontrados transitórios e leves, comprovando a segurança do perfilcarrapatos em 24 cães do estudo, indicando que do spinosad e do amitraz e indicando que o fluralanerpoderia haver algum desafio com relação à exposição pode ser utilizado com segurança em cães. Asa carrapatos durante o estudo. Poucos carrapatos observações detalhadas dos proprietários, os eventosforam encontrados imediatamente após o tratamento, adversos sem importância associados com trêso que foi condizente com o relato de eficácia da tratamentos consecutivos de fluralaner durante 26coleira de amitraz, e foi comprovada a eficácia da semanas e os resultados laboratoriais normais tambématividade do fluralaner contra carrapatos, confirmaram os relatos prévios de demonstração dedemonstrada em outros estudos de campo e segurança do fluralaner em cães [5,7-9].laboratório [5,7,13]. Conclusão A ausência de efeitos adversos sérios (Tabela 3) sugere Concluindo, os resultados desse estudo clínico demonstrarama segurança de ambos os produtos, sendo que o vômito foi que um único tratamento com comprimido mastigávelo evento adverso mais comumente relatado (em 7,1% aromatizado de fluralaner, administrado ao cão pelos[16/224] dos cães tratados três vezes com comprimidos proprietários, fornece um nível de controle de pulgas que é ao menos equivalente àquele fornecido por 3 tratamentosTabela 5. Porcentagem de cães com sintomas de consecutivos com comprimidos de spinosad junto com aDermatite alérgica à Picada de Pulgas que se resolveu coleira de amitraz. Aliado ao alto nível de controle de pulgas,sem interferência de outras medicações até a visita final um alívio substancial de sinais clínicos de DAPP também foi observado. Os comprimidos mastigáveis aromatizados deSintoma de Fluralaner Spinosad + Amitraz fluralaner foram considerados altamente palatáveis para osDAPP cães. Esse estudo também demonstrou um perfil favorável de segurança para o fluralaner. O estudo, portanto, demonstraEritema 89,3% (50/56 cachorros) 70,6% (12/17 cachorros) que os comprimidos mastigáveis aromatizados de fluralaner oferecem um avanço significativo no tratamento e controle deAlopecia 88,2% (30/34) 80,0% (8/10) infestação de pulgas em cães, fornecendo eficácia por 12 semanas através de um único tratamento.Pápulas 92,3% (12/13) 100% (7/7) AbreviaçãoEscamas 80,0% (16/20) 88,9% (8/9) DAPP: Dermatite alérgica à picada de pulgas.Crostas 95,5% (21/22) 100% (7/7)Escoriação 91,7% (11/12) 100% (6/6)10 10

Meadows et al. Parasites & Vectors 2014, 7:375http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/375Conflito de interesses 15. Seward RL, Brokken ES, Plue RE: Ivermectin vs heartworm – aDrs. Meadows, Guerino, e Sun são contratados pela Merck Animal status update. In Proceedings of the Heartworm Symposium ’86. Health. Edited by Otto GF. Washington, DC: American Heartworm Society; 1986:1–8. Contribuição dos autoresCM participou do delineamento do estudo e foi responsável pela sua coordenação e conduta e preparação de manuscrito. FG concebeu oestudo e participou do seu delineamento. FS participou do doi:10.1186/1756-3305-7-375 delineamento do estudo e realizou as análises estatísticas. Todos os Cite esse artigo como: Meadows et al.: A randomized, blinded,autores leram e aprovaram o manuscrito final. controlled USA field study to assess the use of fluralaner tablets in controlling canine flea infestations. Parasites & Vectors 2014 7:375.AgradecimentosOs autores agradecem os veterinários e equipes dos locais de estudopelos seus esforços de recrutamento e trabalho com os pacientesdesse estudo. Os autores também agradecem Allyson L. Smith e CaroleTherrien e equipe do The Veterinary Consultancy LLC pelo seu trabalhocom os locais de estudo.Recebido em 15 de Maio de 2014, aceito em 4 de Agosto de 2014Publicado em 16 de Agosto de 2014Referências 1. Dryden MW, Payne PA, Smith V, Hostetler J: Evaluation of an imidacloprid (8.8% w/w)–permethrin (44.0% w/w) topical spot-on and a fipronil (9.8% w/w)–(S)-methoprene (8.8% w/w) topical spot-on to repel, prevent attachment, and kill adult Ixodes scapularis and Amblyomma americanum ticks on dogs. Vet Ther 2006, 7:173–186. 2. Rust MK: Advances in the control of Ctenocephalides felis (cat flea) on cats and dogs. Trends Parasitol 2005, 21:232–236. 3. Dryden MW, Ryan WG, Bell M, Rumschlag AJ, Young LM, Snyder DE: Assessment of owner-administered monthly treatments with oral spinosad or topical spot-on fipronil/(S)-methoprene in controlling fleas and associated pruritus in dogs. Vet Parasitol 2013, 191:340–346. 4. Snyder DE, Meyer J, Zimmermann AG, Qiao M, Gissendanner SJ, Cruthers LR, Slone RL, Young DR: Preliminary studies on the effectiveness of the novel pulicide, spinosad, for the treatment and control of fleas on dogs. Vet Parasitol 2007, 150:345–351. 5. Rohdich R, Roepke RKA, Zschiesche E: A randomized, blinded, controlled and multi-centered field study comparing the efficacy and safety of Bravecto (fluralaner) against Frontline (fipronil) in flea- and tick-infested dogs. Parasit Vectors 2014, 7:83. 6. Walther FM, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: The effect of food on the pharmacokinetics of oral fluralaner in dogs. Parasit Vectors 2014, 7:84. 7. NADA 141–126 Bravecto Fluralaner Chewable Tablets Dogs. [http://www.fda.gov/downloads/animalveterinary/products/appr ovedanimaldrugproducts/ foiadrugsummaries/ucm399075.pdf] 8. Walther FM, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: Safety of fluralaner chewable tablets (Bravecto), a novel systemic antiparasitic drug, in dogs after oral administration. Parasit Vectors 2014, 7:87. 9. Walther FM, Paul AJ, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: Safety of fluralaner, a novel systemic antiparasitic drug, in MDR1(−/−) Collies after oral administration. Parasit Vectors 2014, 7:86. 10. Medleau L, Clekis T, McArthur TR, Alva R, Barrick RA, Jeannin P, Irwin J: Evaluation of fipronil spot-on in the treatment of flea allergic dermatitis in dogs. J Small Anim Pract 2003, 44:71–75. 11. Bonneau S, Skowronski V, Sanquer A, Maynard L, Eun HM: Therapeutic efficacy of topical hydrocortisone aceponate in experimental flea-allergy dermatitis in dogs. Aust Vet J 2009, 87:287–291. 12. Robertson-Plouch C, Baker KA, Hozak RR, Zimmermann AG, Parks SC, Herr C, Hart LM, Jay J, Hutchens DE, Snyder DE: Clinical field study of the safety and efficacy of spinosad chewable tablets for controlling fleas on dogs. Vet Ther 2008, 9:26–36. 13. Estrada-Peña A, Ascher F: Comparison of an amitraz- impregnated collar with topical administration of fipronil for prevention of experimental and natural infestations by the brown dog tick Rhipicephalus sanguineus. J Am Vet Med Assoc 1999, 214:1799–1803. 14. Plue RE, Jernigan AD, Acre KE, Coleman MW, Currin ST, Ellis AJ, Lange RL, Lange RL, Weiner DR: Field efficacy, safety and acceptability of ivermectin plus pyrantel in growing and adult dogs. In Proceedings of the Heartworm Symposium ’92. Edited by Soll MD. Batavia, IL: American Heartworm Society; 1992:205–208. 11 11

Williams et al. Parasites & Vectors 2014, 7:275http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/275PESQUISA Acesso AbertoFluralaner, uma nova isoxazolina, previne a reprodução de pulgasCtenocephalides in vitro e em ambiente doméstico simuladoHeike Williams1*, David R Young2*, Tariq Qureshi3, Hartmut Zoller1 e Anja R Heckeroth1ResumoHistórico: O fluralaner, uma nova isoxazolina, possui atividade tanto inseticida quanto acaricida através do bloqueiopotente dos canais de cloro acionados por GABA e L-glutamato. Esse estudo investigou os efeitos in vivo e in vitro dareprodução de pulgas quando expostas ao fluralaner.Métodos: Sangue com concentrações sub-inseticidas e variadas de fluralaner (entre 0,09 e 50,0 ng/mL) foi oferecido apulgas por 10 dias, utilizando-se um sistema de membranas. A interrupção da reprodução das pulgas expostas foiavaliada medindo-se a sobrevivência das pulgas, eclodibilidade dos ovos e controle da oviposição e emergência depupas e pulgas adultas. A eficácia do fluralaner para o controle de Ctenocephalides felis in vivo em cães foi avaliadaatravés de um ambiente doméstico simulado infestado por pulgas. Durante o período de pré-tratamento, os cãesforam infestados duas vezes nos dias -28 e -21 com 100 pulgas adultas não-alimentadas para estabelecer umapopulação bem sucedida já no dia 0 do estudo. No dia 0, um grupo de cães foi tratado com fluralaner (Bravecto™; n =10), enquanto outro grupo serviu como controle negativo (n=10). Seguindo o tratamento, cães foram infestados trêsvezes com 50 pulgas nos dias 22, 50 e 78 para simular novas infestações. Contagens de pulgas vivas foram conduzidassemanalmente em todos os cães por 12 semanas iniciando-se 1 dia antes do tratamento.Resultados: O fluralaner inibiu potencialmente a capacidade de reprodução de pulgas in vitro. A oviposição cessoucompletamente com concentrações tão baixas quanto 25,0 ng/mL. Enquanto nenhum efeito ovicida foi observado, ofluralaner exerceu um efeito larvicida com concentrações excepcionalmente baixas (6,25 ng/mL). No ambientedoméstico simulado com infestação de pulgas, a eficácia do controle de pulgas em cães tratados com fluralaner foi>99% a cada mensuração de tempo no período de 12 semanas. Nenhum evento adverso foi observado nos cãestratados com fluralaner.Conclusões: O fluralaner controla completamente a oviposição, o desenvolvimento larval e a reprodução das pulgasmesmo em concentrações sub-inseticidas. O tratamento administrado por via oral de cães com fluralaner é muitoeficaz na eliminação de pulgas em um ambiente doméstico simulado com infestação de pulgas.Palavras-chave: Ctenocephalides felis, Fluralaner, Eficácia Antipulgas, Inseticida, Reprodução, Cão, AmbienteDoméstico SimuladoHistórico A atividade adulticida em cães infestados porO fluralaner é uma nova molécula da classe das pulgas é importante, mas representa apenas parte doisoxazolinas que demonstrou potente atividade acaricida programa de controle de pulgas necessário àe inseticida através de um duplo mecanismo de ligação eliminação eficiente da população de pulgas. Aaos canais de cloro neuronais acionados por GABA e L- população adulta em cães representa somenteglutamato em invertebrados susceptíveis [1,2]. O aproximadamente 5% da infestação total de pulgas emfluralaner tem alta seletividade por artrópodes e um perfil um domicílio, enquanto os 95% restantes consistem dealtamente seguro em vertebrados, incluindo cães [3]. A ovos, larvas e pupas no ambiente doméstico onde viveadministração por via oral de fluralaner (Bravecto™) o cão [6]. Esses estágios de maturação irão reinfestar ofornece uma eficácia de 12 semanas contra infestação de cão ao se tornarem adultos.pulgas e carrapatos em cães [4,5]. Um eficaz controle de pulgas necessita da inclusão*Contato: [email protected]; [email protected] de uma atividade adulticida altamente potente, que1MSD Animal Health Innovation GmbH, Research Antiparasitics, Zur elimine rapidamente as pulgas após o tratamento, paraPropstei, 55270 Schwabenheim, Germany que o alívio seja imediato; a manutenção da alta2David R Young, Young Veterinary Research Services, 7243 East Avenue, eficácia adulticida através do período de tratamento; eTurlock, CA 95380, USA o controle da reprodução das pulgas [7]. O fluralaner éMais informação sobre os autores está disponível no final deste artigo um inseticida sistêmico que mata as pulgas que se © 2014 Wengenmayer et al.; licenciado por BioMed Central Ltd. Este é um artigo de acesso livre distribuíd sob os termos da Licença Atribuída a Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0), que permite o uso, distribuição e reprodução irrestrita em qualquer meio, desde que o trabalho original seja devidamente creditado. A dispensa da dedicatória ao domínio público da Creative Commons (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) aplica-se aos dados disponibilizados neste artigo, salvo indicação em contrário.12 12

Williams et al. Parasites & Vectors 2014, 7:275http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/275alimentam do sangue de cães tratados. Ensaios de Cada baia continha uma cama ocupando metade do piso,campo sugerem que cães tratados com fluralaner são cujo material era feito de carpete. Antes do tratamento,expostos a menor quantidade de pulgas em cada cão foi infestado duas vezes (28 e 21 dias pré-desenvolvimento da população jovem presente no tratamento) com 100 C. felis adultas não-alimentadas, noambiente. Dessa maneira ficou demonstrada a eficácia intuito de estabelecer uma população de pulgas antes dedo controle de pulgas e redução de sintomas de iniciar o tratamento. Uma média de pulgas foi adicionadadermatite alérgica à picada de pulgas. [5]. Portanto, o ao carpete quatro semanas antes da data do tratamento eobjetivo do estudo in vitro foi investigar se as então semanalmente durante o restante do estudo, paraconcentrações de fluralaner abaixo do efeito letal eram encorajar o desenvolvimento de uma população ativa decapazes de inibir a reprodução de pulgas e, portanto, pulgas em estágios juvenis em cada baia. No dia docontribuir para o controle dos estágios intermediários tratamento, os cães do grupo tratado receberam fluralanerde pulgas no ambiente. na dose próxima de 25 mg/kg administrdos por via oral por um ou mais comprimidos mastigáveis aromatizados. Além disso, um estudo simulado de ambiente O(s) comprimido(s) mastigável(is) foi(ram)doméstico foi conduzido para comprovar as propriedades administrado(s) pela inserção no fundo da cavidade oral,do controle de fluralaner não só em cães, mas também da acima da língua, para estimular a deglutição. Cães dopopulação externa de pulgas que poderia naturalmente grupo controle negativo permaneceram sem tratamento.ocorrer em um ambiente domiciliar onde vivesse umanimal infestado. A contagem de pulgas foi realizada em todos os cães 1 dia antes do tratamento, 1 dia após o tratamento e entãoMétodos a cada 7 dias até que o estudo fosse completado, 84 diasExposição in vitro de alimentação por membrana depois. Todas as pulgas vivas coletadas foram recolhidasUm método de alimentação por membrana [8] foi e reinfestaram o cão após a escovação. Cada cão tambémmodificado para avaliar o impacto da exposição do foi infestado com 50 novas pulgas adultas nãofluralaner na reprodução de pulgas. Sangue de ovelha alimentadas nos dias 22, 50 e 78 para simular umadesfibrinado foi preparado em uma série de diluições de infestação natural pós tratamento.fluralaner para obter concentrações entre 50,0 e 0,09ng/mL. Soluções-teste foram preparadas em dobro e cada Análise estatísticapreparação foi testada em duplicata resultando no total de Cada cão individualmente era uma unidade experimental e4 replicações por concentração, junto com um solvente os dados de contagem de pulgas, em cada momento decontrole fluralaner-negativo (uma concentração de tempo, foram analisados separadamente. Dados desolvente equivalente àquela da solução-teste mais contagem de pulgas foram transformados [Y = loge(x + 1)]concentrada de fluralaner) e um controle não-tratado. e analisados por um modelo linear misto incluindo o tratamento como fator fixo e o bloco como fator aleatório. Pulgas adultas não alimentadas (C. felis; 20 machos e O ajuste de Kenward-Rogers foi usado para determinar o20 fêmeas) foram colocadas em uma unidade de plástico grau de liberdade do denominador. Um teste F bicaudal foique foi então fechada com uma tampa telada. Uma grade usado dentro do modelo linear misto para comparaçãodividia a unidade em 2 câmaras: uma superior, para a entre os grupos de tratamento e a significância estatísticaalimentação das pulgas, e outra, inferior, para a coleta de foi declarada quando P ≤ 0,05. O software primário usadoovos [8]. Preparações de sangue teste ou controle (2 mL) para análise foi o SAS versão 9.3.foram colocadas em um tubo de vidro artificial, fechadopor membrana, e esse conjunto foi então inserido na A eficácia foi calculada utilizando-se médiasunidade plástica como fonte de alimento. As unidades de geométricas e aritméticas com a fórmula de Abbott:alimentação foram incubadas (38°C e 60% UR [umidaderelativa]) por 10 dias. Preparações de sangue teste e Eficácia (%) = 100 × (MC - MT)/MC, onde MC era ocontrole-negativo foram trocadas periodicamente (nos número da média geométrica ou aritmética do total dedias 1, 3, 5 e 8) para permitir a alimentação contínua de pulgas adultas nos cães não-tratados e MT o número dapulgas. As pulgas foram transferidas para novas unidades média geométrica ou aritmética total de pulgas adultasplásticas nos dias 5 e 8 para facilitar a coleta de ovos. Os nos cães tratados.ovos coletados foram misturados com um meio nutritivoe incubados (a 28°C e 80% UR) no escuro por 22 (±3) O estudo foi conduzido na Califórnia, EUA, dedias para permitir o seu desenvolvimento. Os parâmetros acordo com a Lei de Bem-Estar Animal, como orientadoregistrados foram: sobrevivência de pulgas, controle de pelo Departamento de Agricultura dos Estados Unidosoviposição, eclodibilidade dos ovos, controle de pupas e (USDA) e a aprovação ética foi obtida antes do seucontrole da emergência de pulgas. início. O estudo foi aprovado pelo Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC no. S11453-00).Estudo in vivo para avaliar a eficácia do controle depulgas em um ambiente doméstico simulado ResultadosVinte cães saudáveis, machos e fêmeas, de raça mista, Impacto na reprodução de pulgas após exposição à≥12 semanas de idade foram alojados em baias membrana de alimentação in vitroindividuais. Dez cães por grupo foram aleatoriamente Exposição ao alimento nas concentrações de 50 ng deescolhidos para receber ou um comprimido mastigável de fluralaner/mL resultou na sobrevivência de pulgas defluralaner (Bravecto™) ou nenhum tratamento. 78,1% (dia 2), 20,0% (dia 3), 8,7% (dia 4) e 1,2% (dia 5). 13 13

Williams et al. Parasites & Vectors 2014, 7:275http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/275Tabela 1. Sobrevivência de pulgas após repasto sanguíneo Tabela 3. Emergência de larvas dos ovos de pulgas decontendo fluralaner em concentrações sub-inseticidas mesma linhagem cujo repasto sanguíneo continhaFluralaner Sobrevivência de pulgas (%) fluralaner em concentrações sub-inseticidas(ng/mL) Dia de exposiçãoa Fluralaner Emergência larval (ng/mL) Dia de exposiçãoa 2 3 4 5 8 9 1050,0 78,1 20,0 8,7 1,2 0 0 0 3 4 5 8 9 1025,0 90,6 67,5 31,9 11,3 0 0 0 50,0 NA NA NA NA NA NA12,5 100 100 67,5 38,9 21,7 17,9 12,3 25,0 NA NA NA NA NA NA6,25 100 100 97,5 92,8 85,0 73,1 69,7 12,5 Não NA NA Sim Sim NA3,13 100 100 98,7 97,8 83,1 79,5 78,8 6,25 Sim Sim Sim Sim Sim Sim1,56 100 100 99,4 99,1 93,9 92,9 90,3 3,13 Sim Sim Sim Sim Sim Sim0,78 100 100 100 100 100 100 100 1,56 Sim Sim Sim Sim Sim Sim0,39 100 100 100 100 100 100 98,7 0,78 Sim Sim Sim Sim Sim Sim0,19 100 100 100 100 100 100 100 0,39 Sim Sim Sim Sim Sim Sim0,09 100 100 100 100 100 100 100 0,19 Sim Sim Sim Sim Sim SimaNenhuma contagem de pulgas foi feita nos dias 6 e 7. 0,09 Sim Sim Sim Sim Sim SimA 25 ng/mL as taxas de sobrevivência de pulgas foram aNenhuma avaliação de emergência de larvas foi feita nos dias 6 e 7.90,6% (dia 2), 67,5% (dia 3), 31,9% (dia 4) e 11,3% (dia NA: não aplicável pois as pulgas foram mortas ou não puseram ovos (Tabela5). A taxa de sobrevivência das pulgas aumentou com 1 e Tabela 2).baixas concentrações (Tabela 1). As concentrações de 50e 25 ng fluralaner/mL alcançaram o controle completo da Eficácia do controle de pulgas in vivo em um ambienteoviposição (100%), pois pulgas que sobreviveram por 4 doméstico simuladoou 5 dias de repasto nessas concentrações não produziramnenhum ovo. Em concentrações tão baixas quanto 12,5 e Nenhum evento adverso foi observado em quaisquer dos6,25 ng de fluralaner/mL, a oviposição foi controlada por cães tratados com fluralaner Bravecto™ seguido à sua99,6% e 80,6%, respectivamente (Tabela 2). O fluralaner administração. A contagem média de pulgasnão alterou a eclosão de larvas pois a eclosão foi (aritmética/geométrica) em cães controle não-tratados foiobservada em quase todos os grupos de pulgas capazes de de 52,3/26,4 pulgas antes do dia de tratamento (dia -1) ebotar ovos (Tabela 3). O desenvolvimento de pupas foi na extensão de 5,1/1,8 a 57,1/40,6 pulgas após ofortemente reduzido (85,1% a 12,5 ng fluralaner/mL, tratamento. A contagem média de pulgas88,7% a 6,25 ng fluralaner/mL) indicando que a (aritmética/geométrica) em cães tratados com fluralanerexposição ao fluralaner possui um potente efeito larvicida foi de 35,0/14,1 pulgas antes do tratamento, 0/0 pulgas(Tabela 4). O mesmo efeito permaneceu através de 100% nos dias 1, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 63, 77 e 84, e 0,1/0,1de controle da emergência de adultos a 12,5 ng pulgas nos dias 49, 56 e 70 após tratamento.fluralaner/mL (Tabela 5). Tabela 4. Controle de desenvolvimento de pupas de ovos de pulgas de mesma linhagem cujo repastoTabela 2. Controle da oviposição após repasto sanguíneo sanguíneo continha fluralaner em concentrações sub-contendo fluralaner em concentrações sub-inseticidasFluralaner inseticidas(ng/mL) Controle de oviposição (%) Fluralaner Controle de desenvolvimento de pupas (%) Dia de exposiçãoa (ng/mL) Dia de exposiçãoa 3 4 5 8 9 10 Médiab 3 4 5 8 9 10 Média b50,0 100 100 100 NA NA NA 100 50,0 NA NA NA NA NA NA NA25,0 100 100 100 NA NA NA 100 25,0 NA NA NA NA NA NA NA12,5 99,6 100 100 98,9 99,1 100 99,6 12,5 100 NA NA 55,2 100 NA 85,16,25 82,6 85,9 81,3 79,9 67,5 86,4 80,6 6,25 90,2 92,4 87,3 86,4 89,9 86,0 88,73,13 32,0 35,7 43,1 70,5 59,9 62,0 50,5 3,13 66,3 68,9 61,7 70,3 62,1 57,4 64,51,56 0 0 17,3 49,8 30,1 29,2 21,1 1,56 35,3 36,3 34,6 35,5 41,6 27,2 35,10,78 8,7 3,0 13,8 12,5 0 18,5 9,4 0,78 7,5 11,4 16,7 10,8 11,9 14,5 12,10,39 6,72 22,8 23,2 23,8 0 20,3 16,1 0,39 9,8 0 1,5 3,3 6,3 0,8 3,60,19 0 5,1 21,0 15,1 0 13,9 9,2 0,19 8,8 0,2 6,8 0 2,7 0 3,10,09 0 11,3 10,9 16,7 0,3 8,1 7,9 0,09 9,1 4,5 1,4 0 5,9 2,9 4,0aNenhuma contagem de ovos foi feita nos dias de exposição 6 e 7.bMédia aritmética. aNenhuma contagem de ovos foi feita nos dias de exposição 6 e 7.NA: não aplicável, pois todas as pulgas foram mortas (Tabela 1). bMédia aritmética. NA: não aplicável, pois as pulgas foram mortas ou não puseram ovos (Tabela 1 e Tabela 2).14 14

Williams et al. Parasites & Vectors 2014, 7:275http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/275Tabela 5. Controle de emergência de pulgas adultas Discussãoapós repasto de pulgas de mesma linhagem cujosangue continha concentrações sub-inseticidas de O fluralaner possui efeitos inibitórios potentes sobre asfluralaner pulgas C. felis como demonstrado anteriormente nosFluralaner Controle de emergência de pulgas adultas (%) experimentos in vivo e in vitro. O controle da reprodução(ng/mL) Dia de exposiçãoa previne a formação de uma população de pulgas no interior do domicílio. Além do estudo de campo que demonstrou 34 5 8 9 10 Médiab que o fluralaner Bravecto™ era eficaz por 12 semanas contra pulgas em cães [5], um estudo in vitro foi realizado50,0 NA NA NA NA NA NA NA para investigar o efeito de fluralaner na reprodução de pulgas utilizando-se concentrações sub-inseticidas.25,0 NA NA NA NA NA NA NA As concentrações de fluralaner testadas nesse estudo12,5 NA NA NA 100 NA NA 100 foram suficientemente baixas, de forma que as pulgas sobreviveram de 2 a 10 dias. Esse tempo de sobrevivência6,25 29,2 0 0 9,2 30,8 0 11,5 permite a reprodução de pulgas, pois ovos viáveis podem ser produzidos 24 horas após o início do repasto das3,13 4,4 11,9 3,2 8,6 7,5 0 5,9 pulgas. As concentrações de fluralaner testadas correlacionaram-se com os efeitos no ciclo reprodutivo.1,56 00 0 10,2 0 0 1,7 Cinquenta a 25 ng fluralaner/mL efetivamente controlaram a oviposição (postura de ovos), e 12,5 a 6,25 ng/mL0,78 3,8 0 0 3,1 1,8 0 1,5 reduziram drasticamente o desenvolvimento de pupas (indicando um forte efeito larvicida). Além de tudo,0,39 00 0 1,6 5,2 0 1,1 concentrações sub-inseticidas tão baixas quanto 12,5 ng fluralaner/mL alcançaram 100% de interrupção da0,19 4,6 0 1,3 0,8 6,7 0 2,2 reprodução de pulgas, ilustrando que o fluralaner fornece uma proteção adicional aos proprietários de cães contra a0,09 1,1 0,5 0 0 0 0 0,3 reinfestação dos seus pets no ambiente doméstico.aNenhuma contagem de ovos foi feita nos dias de exposição 6 e 7. Os potentes efeitos in vitro na reprodução de pulgasbMédia aritmética. confirmam os resultados do estudo in vivo onde os cãesNA: não aplicável, pois as pulgas foram mortas ou não puseram ovos foram tratados com fluralaner Bravecto™ por(Tabela 1, Tabela 2 e Tabela 4). administração via oral comparado com cães-controle não tratados em um ambiente doméstico simulado.Comparadas com o controle, essas contagens foramsignificativamente diferentes (P ≤0,021) em todos osdias de contagem pós-tratamento. Os resultados decálculo de eficácia foram 100% ou muito próximos de100% em todos os momentos de tempo no pós-tratamento (Tabela 6).Tabela 6. Eficácia de controle de pulgas em cães tratados (25 mg de fluralaner/kg de peso corpóreo) comparada comcães não tratados em um ambiente doméstico simuladoDia pós tratamento Média do número de pulgas (geométrica/aritmética) Eficáciaa (%) Valor-P Grupo controle Grupo tratado-1 52,3/26,4 35,0/14,1 N/A N/A1 12,8/6,0 0/0 100/100 0,0017 5,1/1,8 0/0 100/100 0,02114 7,1/2,7 0/0 100/100 0,01221 16,5/4,1 0/0 100/100 0,01128 53,2/24,8 0/0 100/100 0,00035 44,1/15,7 0/0 100/100 0,00042 42,6/10,8 0/0 100/100 0,00249 48,7/20,6 0,1/0,1 99,8/99,7 0,00056 57,1/40,6 0,1/0,1 99,8/99,8 0,00063 42,3/25,6 0/0 100/100 0,00070 30,0/16,2 0,1/0,1 99,7/99,6 0,00077 21,9/12,3 0/0 100/100 0,00084 40,7/33,2 0/0 100/100 0,000aEficácia calculada a partir da média aritmética/geométrica da contagem de pulgasNA: não aplicável 15 15

Williams et al. Parasites & Vectors 2014, 7:275http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/275O ambiente foi criado de forma que permitisse o acesso dos inseticida imediata. Portanto, o tratamento com fluralanercães a uma área forrada com carpete e com alta carga de interrompe o ciclo reprodutivo da pulga e protege tanto ospulgas durante o mês precedente ao tratamento com cães como suas casas de infestações de pulgas por mais defluralaner. Isso resultou em um ambiente com uma próspera 12 semanas sem necessidade de tratamento adicional.população de pulgas, incluindo todos os estágios dedesenvolvimento antes da administração do tratamento, Conflito de interesseslevando a um aumento crescente da carga de pulgas nos cães HW, AH e HZ são todos funcionários da Merck/MSD Saúde Animal. TQcontrole não tratados durante todo o estudo. Portanto, as era funcionário da Merck/MSD Saúde Animal durante o tempo depulgas estiveram continuamente presentes nos cães-controle condução de estudo. DRY forneceu contrato de apoio à pesquisa.durante o estudo, embora tenha sido observada algumavariabilidade no número de pulgas (o estudo foi delineado Contribuição dos autorespara fornecer uma alta carga de pulgas para os controles HW, AH e HZ delinearam o estudo in vitro e o protocolo. HZ auxiliou nadurante todo o período de avaliação). Seguindo o condução do estudo in vitro e foi responsável pela análise dos dados.tratamento, as populações de pulgas foram eficazmente DY e TQ prepararam o delineamento do estudo in vivo e o protocolo econtroladas nos cães tratados com fluralaner Bravecto™, foram responsáveis pela análise de dados. HW redigiu o manuscrito ecom eficácia de – ou próxima de – 100% durante as 12 todos os autores revisaram e aprovaram a versão final.semanas seguintes ao tratamento. Agradecimentos A atividade adulticida de longa duração de fluralaner Os autores gostariam de expressar sua sincera apreciação pelaBravecto™ fornece dois benefícios com relação ao assistência recebida das seguintes pessoas: Rob Armstrong forneceucontrole de pulgas: primeiro, previne uma significativa valioso apoio na preparação do manuscrito. Mirjam Békefi, Angelikareinfestação dos cães pelas fases imaturas do ambiente; Raschendorfer e Annette Schmitt auxiliaram na condução do estudo insegundo, impede que novos ovos de pulgas sejam vitro. Melissa A Petersen, Robyn L Slone and Fanghsi Sun pelaadicionados ao ambiente, pois as fêmeas de pulgas assistência na condução do estudo de eficácia em condições simuladasadultas são mortas em cerca de 8 horas (antes que da infestação de pulgas no ambiente doméstico.produzam ovos) [9]. Ambos os efeitos levam à depleçãoda população de pulgas no ambiente. Os estudos descritos Declaração de conformidadeaqui indicam que as capacidades de controle de pulgas O estudo in vitro foi conduzido na Alemanha, como um controlepelo fluralaner combinam o efeito adulticida com eficácia negativo, estudo não BPL com compatibilidade de recursos BPL. Ode longa duração e, adicionalmente, prevenção efetiva da estudo in vivo em cães foi conduzido sob BPC pela Young Veterinaryreprodução de pulgas. Esta é uma vantagem sobre Research Services, uma organização de pesquisa contratada pelos EUA.adulticidas puros que são geralmente combinados comum regulador de crescimento de insetos (IGR na sigla em Descrição dos autoresinglês) para fornecer o mesmo efeito. 1 MSD Animal Health Innovation GmbH, Pesquisa Antiparasitária, Zur Propstei, 55270 Schwabenheim, Germany. 2David R Young, Young O controle altamente eficaz das populações de pulgas Veterinary Research Services, 7243 East Avenue, Turlock, CA 95380,no ambiente foi registrado por inseticidas aplicados pela USA. 3Tariq Qureshi, 490 Franklin Circle, Yardley, PA 19067, USA.via tópica [7], mas o mesmo não ocorreu de formaconfiável com inseticidas administrados via sistêmica, Recebido: 24 Abril 2014 Aceito: 13 Junho 2014avaliados previamente [10]. Os resultados de ambos os Publicado: 19 Junho 2014estudos in vitro e in vivo, analisados conjuntamente,apoiam o argumento da eficácia do fluralaner quanto ao Referênciascontrole de pulgas. Além do rápido efeito de eliminaçãode pulgas dentro de 8 horas [9], os estudos indicaram que 1. Gassel M, Wolf C, Noack S, Williams H, Ilg T: The novel isoxazolineo fluralaner, como sistema de tratamento sistêmico, é ectoparasiticide fluralaner: Selective inhibition of arthropod γ-bem sucedido no controle do desenvolvimento de aminobutyric acid- and L-glutamate-gated chloride channelspopulações de pulgas no ambiente. and insecticidal/acaricidal activity. Insect Biochem Mol Biol 2014, 45:111–124. A eficácia dos tratamentos mensais depende dacolaboração do proprietário do cão. Recentemente foi 2. Ozoe Y: γ-Aminobutyrate- and glutamate-gated chloridedemonstrado que a colaboração do proprietário, ao se channels as targets of insecticides. Adv Insect Physiol 2013, recomendar um segundo tratamento, é fraca [11], o que pode 44:211–286. prejudicar o controle de pulgas. Os resultados relatados aquifornecem evidência de que um único tratamento sistêmico 3. Walther FM, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: Safety ofde fluralaner Bravecto™ fornece 12 semanas de controle da fluralaner chewable tablets (Bravecto™), a novel systemicpopulação de pulgas e é uma nova ferramenta valiosa para antiparasitic drug, in dogs after oral treatment. Parasit Vectors conseguir um controle de pulgas efetivo e de longa duração 2014, 7:87. em cães e em suas residências. 4. Kilp S, Ramirez D, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: Conclusões Pharmacokinetics of fluralaner in dogs following a single oralO fluralaner é um poderoso inibidor da reprodução das or intravenous administration. Parasit Vectors 2014, 7:85. pulgas em seus vários estágios de desenvolvimento,inclusive em níveis de exposição abaixo da sua atividade 5. Rohdich N, Roepke RKA, Zschiesche E: A randomized, blinded, controlled and multi-centered field study comparing the efficacy and safety of Bravecto™ (fluralaner) against Frontline™ (fipronil) in flea- and tickinfested dogs. Parasit Vectors 2014, 7:83. 6. Dryden MW: Host association, on host longevity and egg production of Ctenocephalides felis. Vet Parasitol 1989, 34:117– 122. 7. Dryden MW, Payne PA, Smith V, Heaney K, Sun F: Efficacy of indoxacarb applied to cats against the adult cat flea, Ctenocephalides felis, flea eggs and adult flea emergence. Parasit Vectors 2013, 6:126. 8. Wade SE, Georgi JR: Survival and reproduction of artificially fed cat fleas, Ctenocephalides felis Bouché (Siphonaptera: Pulicidae). J Med Entomol 1988, 25:186–190. 16 16

Williams et al. Parasites & Vectors 2014, 7:275http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/275 9. Bravecto EPAR summary for the public. European Medicines Agency http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/EPAR_- _Summary_for_the_public/veterinary/002526/WC500163861.pdf. 10. Dryden MW, Payne PA, Smith V, Ritchie LD, Allen L: Evaluation of the ovicidal activity of lufenuron and spinosad on fleas' eggs from treated dogs. Intern J Appl Res Vet Med 2012, 10(3):198–204. 11. Beck S, Schein E, Baldermann C, von Samson-Himmelstjerna G, Kohn B: Tick infestation and tick prophylaxis in dogs in the area of Berlin/Brandenburg – results of a questionnaire study. Zusammenfassung Berl Muench Tieraerztl Wochenschr 2013, 126:69–76.doi:10.1186/1756-3305-7-275 Cite esse artigo como: Williams et al.: Fluralaner, a novel isoxazoline, prevents flea Ctenocephalides felis reproduction in vitro and in a simulated home environment. Parasites & Vectors 2014 7:275. 17 17

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:105http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/105RELATÓRIO RESUMIDO Acesso abertoSegurança do tratamento simultâneo com Bravecto™ (fluralaner) ecoleira Scalibor™ (deltametrina) em cãesFeli M Walther1*, Petr Fisara2, Mark J Allan1, Rainer K A Roepke1 and Martin C Nuernberger1ResumoHistórico: Bravecto™ (fluralaner; MSD Saúde Animal) é um novo ectoparasiticida sistêmico para cães que fornece umcontrole de longa duração de pulgas e carrapatos após uma única dose administrada por via oral. A coleira Scalibor™(deltametrina; MSD Saúde Animal) é geralmente utilizada para prevenção das picadas dos insetos vetores daleishmaniose. Esse estudo investigou a segurança do uso simultâneo de Bravecto™ e coleira Scalibor™ nos esquemas dedosagem recomendados.Achados: Durante o período de 24 semanas não houve achados clínicos relacionados ao uso simultâneo de Bravecto™e coleira Scalibor™ em cães, no esquema de dosagem recomendado.Conclusões: O tratamento simultâneo de Bravecto™ e coleira Scalibor™ é bem tolerado pelos cães.Palavras-chave: Bravecto™, Fluralaner, Cão, Segurança, Scalibor™, DeltametrinaAchados Vinte cães saudáveis, machos e fêmeas, de váriasBravecto™ (princípio ativo: fluralaner) é um novo raças foram aleatoriamente inscritos em dois grupos deproduto inseticida e acaricida administrado por via estudo. No dia 0, os cães do grupo de tratamento foramsistêmica. Numerosos estudos, incluindo um estudo de equipados com coleira Scalibor™ e receberam umcampo recente com cães, mostraram que uma única dose comprimido mastigável de Bravecto™ (fluralaner)de comprimido mastigável de fluralaner administrada enquanto os cães do grupo controle permaneceram sempor via oral fornece controle de pulgas e carrapatos por tratamento. Cães do grupo de tratamento receberamdoze semanas [1]. Bravecto™ em uma segunda ocasião no dia 84. As doses administradas de fluralaner foram de 27 – 50 mg/kg. Scalibor™ (princípio ativo: deltametrina) é uma Como indicado no folheto do produto, cães foramcoleira que fornece um efeito repelente por mais de 6 tratados com Bravecto™ perto do horário de refeição [3],meses contra ectoparasitas, incluindo flebótomos e pois a biodisponibilidade do fluralaner é maior emmosquitos [2]. O mosquito palha Lutzomyia longipalpis é animais alimentados [4]. Todos os cães foramo vetor da Leishmania spp. cuidadosamente avaliados quanto à saúde geral durante a primeira hora consecutiva ao tratamento e foram Para proteger os cães da infestação de pulgas e examinados por um veterinário às 6, 12, 24, 32, 48, 56,carrapatos, assim como de picadas de mosquitos, 72, 80 horas e 4, 6, 8, 10 dias após cada tratamento comambos os produtos podem ser administrados Bravecto™. O veterinário buscou por alterações desimultaneamente. Esse estudo foi conduzido em cães comportamento, pelame e pele, incluindo o local desaudáveis para confirmar a segurança do uso colocação da coleira, locomoção, respiração, olhos,simultâneo de Bravecto™ e coleira Scalibor™ nos orelhas, focinho, cavidade oral, mucosas, tempo deesquemas de uso recomendados [2,3]. perfusão capilar, palpação de pulso, vômitos, fezes e urina presentes na baia, e outras alterações visíveis. AsMétodos observações clínicas foram esquematizadas de forma aO estudo foi conduzido em Queensland, Austrália, após a cobrir o período de máxima exposição sistêmica aoobtenção da autorização das autoridades regulatórias fluralaner [5] e o tempo para que a coleira Scalibor™relevantes (Departamento de Agricultura, Pesca e atinja sua eficácia máxima após a aplicação [2]. Portanto,Florestas de Queensland, No de aprovação CA sinais clínicos associados com o uso simultâneo poderiam2013/06/701). ser mais evidentes nessas marcações de tempo. Os exames veterinários continuaram nos dias 27, 55, 83, 111,*Contato: [email protected] 139 e 168 (o exame incluía a avaliação de alterações de1MSD Animal Health Innovation GmbH, Zur Propstei, 55270 comportamento, locomoção, auscultação cardíaca eSchwabenheim, Alemanha pulmonar, batimentos cardíacos, respiração, pulso,A informação completa sobre o autor está disponível no final do artigo. © 2014 Wengenmayer et al.; licenciado por BioMed Central Ltd. Este é um artigo de acesso livre distribuíd sob os termos da Licença Atribuída a Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0), que permite o uso, distribuição e reprodução irrestrita em qualquer meio, desde que o trabalho original seja devidamente creditado. A dispensa da dedicatória ao domínio público da Creative Commons (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) aplica-se aos dados disponibilizados neste artigo, salvo indicação em contrário.18 18

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:105http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/105mucosas, tempo de perfusão capilar, palpação anormal, Agradecimentoslinfonodos superficiais, pele (incluindo o local de contato Os autores agradecem Von Berky Veterinary Services, Kurwongbah,com a coleira), olhos, pupilas, orelhas, focinho, boca, Queensland, Austrália, pelo auxílio com o estudo.dentes, língua, ânus, vulva, orifício peniano, glândulasmamárias, testículos, articulações, pés, coxins, Descrição dos autorestemperatura retal) e observações de saúde em geral 1MSD Animal Health Innovation GmbH, Zur Propstei, 55270(observação dos cães em sua baia, incluindo o local de Schwabenheim, Germany. 2MSD Animal Health, 26 Artisan Road, Sevencontato com a coleira) foram realizados em todos os cães Hills, NSW 2172, Australia.uma a duas vezes ao dia. O pesquisador veterinárioavaliou e anotou todos os parâmetros e todos os achados Recebido: 24 de fevereiro 2014 Aceito: 13 de março 2014clínicos relacionados ao tratamento com Bravecto™ e/ou Publicado: 19 março 2014Scalibor™. O peso corpóreo foi mensuradosemanalmente. Referências Em intervalos mensais, cães de ambos os grupos 1. Rohdich N, Roepke RKA, Zschiesche E: A randomized, blinded,receberam moxidectina administrada por via oral na dose controlled and multi-centered field study comparing themínima de 3 mcg/kg para prevenção do verme do efficacy and safety of Bravecto™ (fluralaner) againstcoração. Nenhum achado clínico foi observado nos cães FrontlineTM (fipronil) in flea- and tick-infested dogs. Parasitdo grupo controle ou no grupo de tratamento associado Vectors 2014, 7:83. com a administração de moxidectina. 2. SPC_114758 Scalibor Protectorband 4% w/w 48 cm collar for small Discussão e resultados and medium sized dogs and SPC_114757 Scalibor Protectorband Durante o período de estudo de 24 semanas não houve 4% w/w 65 cm collar for large sized dogs; 2010. http://www.vmd.defra.gov.uk/ProductInformationDatabase/. achados clínicos relacionados ao tratamento simultâneo deBravecto™ e coleira Scalibor™ em cães. 3. European Commission: Community register of veterinary medicinal products, Product information Bravecto, Annex 1 Summary of No grupo de tratamento, reações menores de pele, product characteristics: 2014. localizadas e transitórias, foram observadas no local de http://ec.europa.eu/health/documents/communityregister/html/vaplicação da coleira, e foram consideradas como 158.htm. resultado da ação mecânica da coleira. Essas observaçõesnão são esperadas em cães usando coleiras e são 4. Walther FM, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: The effect ofconsistentes com o folheto do produto [2]; nenhuma das food on the pharmacokinetics of oral fluralaner in dogs. Parasitcoleiras precisou ser removida. Tais achados não foram Vectors 2014, 7:84. relatados em estudos onde somente o Bravecto™ tenhasido administrado [1,6]. Nenhum outro achado clínico 5. Kilp S, Ramirez D, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: relacionado ao uso de cada produto separadamente, ou o Pharmacokinetics of fluralaner in dogs following a single oraluso concomitante de Bravecto™ e coleira Scalibor™ foram or intravenous administration. Parasit Vectors 2014, 7:85. observados. Não houve mudanças óbvias na média dopeso corporal durante o estudo (o peso corporal médio do 6. Walther FM, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: Safety ofgrupo tratado foi de 17,3 kg pré-tratamento no dia -1 e fluralaner chewable tablets (Bravecto™), a novel systemic18,1 kg no dia 168). antiparasitic drug, in dogs after oral administration. Parasit Vectors 2014, 7:87.ConclusãoO tratamento concomitante de Bravecto™ (fluralaner) e doi:10.1186/1756-3305-7-105 coleira Scalibor™ (deltametrina) em cães é bem tolerado. Cite esse artigo como: Walther et al.: Safety of the concurrent treatment of dogs with Bravecto™ (fluralaner) and Scalibor™ Conflito de interesses protectorband (deltamethrin). Parasites & Vectors 2014 7:105.FMW, PF, MJA, RKAR e MCN são funcionários da Merck/MSD SaúdeAnimal.Contribuição dos autoresFMW, PF, MJA, RKAR e MCN são os autores do delineamento doestudo, monitoraram o estudo e interpretaram os resultados. Todos osautores revisaram e aprovaram a versão final do manuscrito. 19 19

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:87http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/87PESQUISA Acesso AbertoSegurança dos comprimidos mastigáveis de fluralaner (Bravecto™),uma nova droga antiparasitária sistêmica, após administração porvia oral em cãesFeli M Walther*, Mark J Allan, Rainer KA Roepke e Martin C NuernbergerResumoHistórico: O fluralaner é um novo inseticida e acaricida sistêmico que fornece uma longa eficácia após um únicotratamento administrado por via oral em cães. Esse estudo investigou a segurança da administração de comprimidosmastigáveis de fluralaner por via oral para cães na dose mais alta recomendada e em múltiplos dessa dose.Métodos: Trinta e dois (16 machos e 16 fêmeas) cães Beagle saudáveis de 8 semanas de idade pesando entre 2,0 – 3,6kg na primeira administração foram incluídos nesse estudo. O fluralaner foi administrado em três ocasiões emintervalos de 8 semanas em doses de 56, 168 e 280 mg ou mais de fluralaner/kg de peso corporal, o equivalente a 1, 3e 5 vezes a dose máxima recomendada de fluralaner; os cães tratados com placebo serviram de controle. Durante oestudo, todos os cães foram observados clinicamente, e seu estado de saúde foi cuidadosamente monitoradoincluindo o desenvolvimento de peso corpóreo, consumação de alimento e mensuração de hematologia, coagulação,bioquímica sérica (incluindo a mensuração de nível de ACTH e proteína-C reativa) e urinálise.Resultados: Não houve achados clínicos relativos ao tratamento com fluralaner. Diferenças estatisticamentesignificantes entre os grupos tratados e o grupo controle foram observadas para alguns parâmetros de patologiaclínica e peso dos órgãos; nenhum desses achados foi considerado de relevância clínica.Conclusão: A administração por via oral de fluralaner na dose máxima recomendada (56 mg/kg) em intervalos de 8semanas é bem tolerada; sua margem de segurança é maior do que 5X a dose recomendada para cães saudáveis depelo menos oito semanas de idade, pesando pelo menos 2 kg.Palavras-chave: Fluralaner, Cão, Segurança, Bravecto™Histórico Essa atividade de longa ação oferece um tratamento maisO fluralaner é um novo produto inseticida e acaricida conveniente sobre o tratamento mensal de controle deadministrado sistemicamente que fornece longa eficácia pulgas e carrapatos, com vantagem potencial deapós administração por via oral em cães. O fluralaner complacência.pertence a uma nova classe de compostos com atividadeantiparasitária, as isoxazolinas. Esses compostos têm Esse estudo foi delineado para demonstrar aatividade contra o ácido γ-aminobutírico (GABA) e segurança do tratamento sistêmico e para investigarcanais de cloro ativados por glutamato com seletividade qualquer impacto possível na saúde pela administraçãosignificativamente maior pelos neurônios do inseto do por via oral repetida a cães saudáveis, tanto na máximaque sobre os neurônios de mamíferos [1]. Um estudo de dose recomendada quanto em múltiplas sobredoses.campo demonstrou que uma única administração defluralaner por via oral a cães fornece pelo menos doze Métodossemanas de controle de pulgas e carrapatos [2]. Esse estudo randomizado, de grupo paralelo e cego, incluiu 32 (16 machos e 16 fêmeas) cães Beagle de 8*Contato: [email protected] semanas de idade. Um total de 24 cães recebeu fluralanerMSD Animal Health Innovation GmbH, Zur Propstei, Schwabenheim repetidamente e 8 cães receberam placebo e serviram55270, Alemanha como grupo controle. O delineamento do estudo foiA informação completa sobre o autor está disponível no final do artigo. baseado nos requerimentos de segurança animal VICH GL 43 para produtos farmacêuticos veterinários [3]. © 2014 Wengenmayer et al.; licenciado por BioMed Central Ltd. Este é um artigo de acesso livre distribuíd sob os termos da Licença Atribuída a Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0), que permite o uso, distribuição e reprodução irrestrita em qualquer meio, desde que o trabalho original seja devidamente creditado. A dispensa da dedicatória ao domínio público da Creative Commons (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) aplica-se aos dados disponibilizados neste artigo, salvo indicação em contrário.20 20

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:87http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/87 Este estudo foi conduzido na Irlanda em Tabela 1. Estudo de peso e idade no momento doconformidade com a legislação nacional irlandesa de primeiro tratamentoproteção animal. O plano de estudo foi aprovado pelo Parâmetro Grupocomitê de ética do Charles River Laboratories PreclinicalServices Ireland Ltd. O número de licença experimental Controle 1X 3X 5Xdo pesquisador era B100/3771. Fluralaner Fluralaner Fluralaner Filhotes de Beagle foram selecionados para o Peso Intervalo 2,1-2,8 2,0-3,6 2,0-3,3 2,0-3,0estudo no dia -14 (início da ambientação) e foram (kg)considerados saudáveis na avaliação física e clínico-patológica iniciais. Os cães receberam sulfadiazina e Média 2,6 2,8 2,8 2,7trimetoprim durante a ambientação para profilaxia dacoccidiose, que poderia ocorrer em colônias de cães. Idade Intervalo 56-62 54-62 56-59 54-62Amostras de fezes coletadas de todos os cães antes do (dias)início do estudo revelaram coccídeos para váriasamostras; entretanto, todos os cães estavam em bom Média 58 57 57 58estado geral e, portanto, foram incluídos no estudo. Oscães foram alojados em uma sala climatizada (16° - Os cães foram pesados antes de cada tratamento com20°C), cuja duração do período de luz era de 10 horas fluralaner para cálculo da dose apropriada. Ume de escuro de 14 horas. Os cães foram alimentados comprimido único inteiro ou uma combinação decom uma dieta comercial padrão nas doses comprimidos inteiros, contendo 112,5 mg ou 250 mg derecomendadas. Os cães foram alojados fluralaner foram administrados a cada cão para liberar umaindividualmente desde o dia -3 até o final do estudo. dose tão próxima possível quanto à da dose calculadaTodos os cães foram vacinados uma vez contra (Tabela 2). Seguindo a administração de comprimidos,Bordetella bronchiseptica e vírus da parainfluenza uma pequena quantidade de água foi administrada paracanina e duas vezes (com intervalo de 5 semanas) encorajar a deglutição. Cães do grupo controle nãocontra o vírus da cinomose, adenovírus canino tipo 2, receberam fluralaner e receberam placebo com água nosparvovírus canino, vírus da parainfluenza canina e dias 0, 56 e 112. Nos dias de tratamento, os cães de todosLeptospira interrogans, com a segunda vacina aplicada os grupos receberam uma porção da sua ração normal22 dias após o primeiro tratamento com diária aproximadamente 10 a 20 minutos antes dofluralaner/placebo para infecção intestinal parasitária. tratamento e a porção remanescente da ração diária logoNenhum achado clínico foi observado em qualquer cão após o tratamento. Os cães foram alimentados próximo aoem associação com a vacinação ou vermifugação. horário do tratamento para garantir uma alta exposição sistêmica ao fluralaner, pois a biodisponibilidade do Os cães foram aleatoriamente alocados em grupos fluralaner é maior em cães alimentados [5].utilizando um procedimento de randomização em bloco.Os cães foram separados por sexo e classificados em Os cães foram observados quanto a avaliação doordem decrescente de peso. Caso dois cães tivessem o estado de saúde geral por duas vezes ao dia através domesmo peso, seriam subclassificados pelo número estudo. Além disso, todos os cães foram observados pordecrescente do microchip. Os quatro cães mais pesados um técnico quanto a sintomas como engasgos, salivação,de cada sexo formaram um bloco que foi alocado regurgitação do comprimido ou vômito durante arandomicamente para cada um dos quatro grupos, e o primeira hora após o tratamento. Avaliações clínicasprocesso foi repetido até que 4 fêmeas e 4 machos fossem detalhadas foram feitas por um veterinário, que foi cegoalocados para cada grupo. Três grupos receberam (mascarado) para o tratamento que cada cão recebeu,fluralaner em diferentes dosagens e um grupo serviu antes de cada tratamento e nas horas 1, 2, 3, 4 e 8 apóscomo controle placebo. cada tratamento. Esses exames incluíram avaliação de alterações no comportamento, pelame, locomoção, O espectro de dose recomendado de fluralaner respiração, olhos (secreção, midríase, miose, opacidadedurante o uso clínico de rotina é entre 25 e 56 mg/kg córnea), mucosas, salivação, auscultação cardíaca,[2,4]. Esse estudo avaliou a administração por via oral vômito, fezes e urina presentes na baia, e outrasde fluralaner, formulado como um comprimido alterações visíveis. Exames físicos foram feitos em todosmastigável, a uma dose de tratamento maior do que 1, 3 os cães por um veterinário cego nos dias -14, -7, -1, 1, 55,ou 5 vezes superior à recomendada, i.e. mais de 56 57, 111, 113 e 167.(grupo 1X), 168 (grupo 3X), ou 280 (grupo 5X) mg defluralaner/kg. A formulação do comprimido utilizada foi Tabela 2. Variação da dose de fluralaner administrada aa formulação comercial final projetada para ser cães em cada grupocomercializada como Bravecto™ [MSD Saúde Animal, Tratamento Grupo4], produzida sob Boas Práticas de fabricação (BPF).Foram administradas três doses de fluralaner a 1X 3X 5Xintervalos de 8 semanas (56 dias) nos dias 0, 56 e 112, Fluralaner Fluralaner Fluralanercom a primeira dose administrada às 8 semanas de idade(54-62 dias) e 2,0 – 3,6 kg de peso (Tabela 1). Primeiro tratamento 3,3 – 56,3 139,4 – 168,8 255,2 – 281,3 (dia 0) Segundo tratamento 47,2 – 55,6 153,1 – 163,0 253,1 – 272,5 (dia 56) Terceiro tratamento 43,1 – 55,3 151,5 – 166,0 254,2 – 277,8 (dia 112) 21 21

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:87http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/87Tabela 3. Parâmetros de patologia clínica analisados e Tabela 3. Parâmetros de patologia clínica analisados emédia de resultados de 162 dias para o grupo controle média de resultados de 162 dias para o grupo controlee o grupo 5X fluralaner e o grupo 5X fluralaner (Continuação) Parâmetro (unidade) Controle Fluralaner 5X Sódio (mmol/L) 148,6 147,8Hematologia Basófilos (x 10^9/L) 0,175 0,171 Ácidos biliares totais (μmol/L) 5,98 4,51 Eosinófilos (x 10^9/L) 0,368 0,748 Bilirrubina total (μmol/L) 1,78 2,10 Hematócrito (L/L) 0,476 0,451 Proteína total (g/L) 52,88 53,38 Hemoglobina (g/dL) 15,24 14,29 Triglicérides (mmol/L) 0,44 0,34 Células grandes não 0,04 0,06 Ureia (mmol/L) 5,20 4,08 classificadas (x 10^9/L) Urinálise Bilirrubina (mg/dL), cetonas 0 0 (mg/dL), glicose (mg/dL), Linfócitos (x 10^9/L) 3,81 4,13 turbidez Hemoglobina corpuscular 21,01 21,26 Pigmentos sanguíneos 0,029 0,004 média (pg) (mg/dL) Concentração média de 31,99 31,65 Leucócitos (cels/μL) 150 106 hemoglobina corpuscular (g/dL) pH 6,44 6,44 Volume corpuscular médio (fL) 65,69 67,14 Proteina (mg/dL) 8,75 5,00 Monócitos (x 10^9/L) 0,56 0,60 Densidade específica 1,031 1,025 Neutrófilos (x 10^9/L) 6,67 6,65 Urobilinogênio (mg/dL) 0,40 0,20 Plaquetas (x 10^9/L) 506 536 Volume (mL) 133 153 Hemácias (x 10^12/L) 7,24 6,74 Coloração da urina Amarelo palha – Amarelo citrino Reticulócitos (x 10^9/L) 70,8 53,3 Células brancas totais (x 11,62 12,34 Exame microscópico (cristais, Distribuição de frequência 10^9/L) cilindros, hemácias, semelhante leucócitos, células epiteliais,Coagulação Tempo de tromboplastina 12,78 13,59 bactérias, outras alterações) parcial ativada (s) Fibrinogênio (mg/dL) 128,3 172,0 Esses exames incluíram avaliações de alterações no comportamento, locomoção, sistema musculoesquelético, Tempo de protrombina (s) 6,08 6,16 pelame, pele, linfonodos superficiais, olhos, pupilas, orelhas, cavidade oral, mucosas, tempo de perfusãoClínico Hormônio 32,89 34,68 capilar, respiração, auscultação cardíaca e trato Adrenocorticotrófico respiratório, frequência cardíaca, frequência respiratória, (pg/mL) pulso, palpação anormal, temperatura retal, qualquer outra anormalidade e condição corporal de 1 (caquexia) aBioquímica Alanina aminotransferase 41,9 39,3 5 (obesidade). (U/L) A consumação de alimento individual foi registrada Albumina (g/L) 34,75 33,13 diariamente e o peso corporal foi registrado semanalmente através do estudo. Amostras de sangue Razão Albumina/globulina 1,96 1,65 foram coletadas para exames de patologia clínica (hematologia, coagulação, bioquímica sérica incluindo Fosfatase alcalina (U/L) 70,50 72,00 ACTH e proteína C-reativa; Tabela 3) antes do primeiro tratamento e nos dias 8, 50, 106 e 162; e para Amilase (U/L) 900 800 monitorar a exposição sistêmica ao fluralaner antes e 2, 7, 14 e 28 dias após cada tratamento. Amostras de Aspartato aminotransferase 37,63 35,75 urina foram coletadas antes do primeiro tratamento e (U/L) nos dias 7/8, 49/50, 105/106 e 161/162. Cálcio (mmol/L) 2,77 2,76 Para completar a avaliação de segurança, todos os cães foram submetidos a um exame post mortem como Cloro (mmol/L) 113,50 115,13 exigido por VICH GL 43 [3]. No dia 168, todos os cães foram sedados por injeção intramuscular de Colesterol (mmol/L) 5,96 5,68 quetamina e xilazina e então eutanasiados pela injeção intravenosa de pentobarbital sódico conforme o plano Creatina quinase (U/L) 306,5 223,4 de estudo. Um exame post mortem completo foi realizado em todos os cães sob a supervisão de um Creatinina (μmol/L) 54,25 50,50 veterinário patologista cego. Os órgãos selecionados foram pesados e vários tecidos foram examinados por Proteína C-reativa (μg/mL) 3,84 10,16 histopatológico (Tabela 4). Gama glutamil 3,50 3,13 transpeptidase (U/L) Globulina (g/L) 18,13 20,38 Glucose (mmol/L) 6,24 6,24 Fosfato inorgânico (mmol/L) 2,14 2,14 Lactato desidrogenase (U/L) 32,50 23,88 Magnésio (mmol/L) 0,69 0,71 Fosfolipídio (mmol/L) 6,03 5,83 Potássio (mmol/L) 4,75 4,7522 22

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:87http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/87Tabela 4. Tabela de órgãos e tecidos examinados patologia clínica (incluindo parâmetros de urinálise),por histopatológico e pesagem de órgãos frequência cardíaca e temperatura retal foramÓrgão/tecido examinado Órgão foi analisados utilizando-se um modelo misto dehistopatologicamente pesado? mensuração repetida de análise de covariância. Parâmetros categóricos de urinálise foram analisadosCérebro √ utilizando-se estatística descritiva. O peso dos órgãos foi analisado usando-se modelos de análise deCoração √ variância. Distribuição de frequências do número de animais com alterações durante as avaliações clínicasFígado √ ou exame físico foram compiladas para parâmetros categóricos.Baço √ Para parâmetros clínico-patológicos, variações deRins √ referência específicas foram compiladas, pois esses valores foram considerados mais adequados àGlândula pituitária √ população canina em questão. Esse intervalo de referência incluiu resultados do grupo controle emTimo √ todos os momentos de marcação de tempo (antes da dose placebo e nos dias 8, 50, 106 e 162) e dosTireoide e paratireoides √ grupos tratados com fluralaner antes do primeiro tratamento. Como apoio, o intervalo de referência deAdrenais √ controles anteriores, do laboratório de patologia clínica ou da literatura podem ser usados para avaliarTestículos √ os resultados [6]. Todos os parâmetros de patologia clínica estatisticamente significantes que resultaramEpidídimos √ diferentes foram comparados com esse intervalo de referência específico de estudo para avaliação daPróstata √ relevância clínica. Valores individuais situados fora desse intervalo de referência foram analisados paraOvários √ possível relevância clínica. A relevância clínica foi analisada pelo pesquisador veterinário baseada nosÚtero com cervix √ seguintes critérios: transitoriedade (observação temporária), relação dose-resposta, valores próximosTraqueia, pulmão - ou dentro do intervalo de referência, associação com evidência de sinais clínicos e com alteração tissularOlhos, nervo ciático - no exame post mortem ou histopatológico.Seções diferentes do cordão espinhal - O pesquisador veterinário avaliou todos os parâmetros registrados e quaisquer achados para sua relação com oGlândula salivar submandibular - tratamento de fluralaner. Quaisquer outros achados relevantes relacionados ao tratamento foram classificadosLíngua, esôfago - como eventos adversos.Laringe, faringe - Discussão e resultados Não houve achados relacionados ao tratamento comArco aórtico - fluralaner para nenhum dos parâmetros avaliados.Bexiga - É esperado que o intervalo de tratamento de 8 semanas utilizado no presente estudo seja menor doPâncreas - que o intervalo de 12 semanas de tratamento recomendado para comprimidos de fluralaner naDiferentes seções do trato gastrointestinal, - prática clínica veterinária [2,4]. Nesse estudo, umPlacas de Peyer intervalo de tratamento de 8 semanas foi eleito no intuito de fornecer dados para que os clínicos possamFêmur, articulação óssea, esterno - optar por um intervalo de tratamento mais curto sob condições de campo [4], e para fornecer uma margemMúsculo esquelético - de segurança adicional em comparação com as condições esperadas de campo.Pele, glândula mamária - A maior dose de fluralaner administrada durante oLinfonodos (submandibular, brônquico, - estudo foi a um cão de oito semanas de idade no grupomesentérico) 5X (281,3 mg/kg; Tabela 2). O fluralaner foi administrado em três ocasiões, já que dados anterioresBexiga - de farmacocinética (não publicados) mostraram que três tratamentos são suficientes para atingirVagina - concentrações plasmáticas estáveis.Lesões grosseiras -Amostras de tecidos foram fixadas por formalina(epidídimos e olhos foram fixados com fixador de Davidson,e testículos em fixador de Davidson modificado) eincorporados em parafina. Fatias de microscopia foramcoradas com hematoxilina e eosina. Fatias adicionaiscoradas com óleo vermelho O, congeladas e fixadas emformalina, foram preparadas para o coração, rim e fígadopara comprovar a presença de gordura. Esfregaços demedula óssea do fêmur foram preparados e corados comcoloração de May Grunewald’s Giemsa. Todas as amostrasforam avaliadas por um histopatologista veterinário. Peso, consumo de alimento (medido em intervalossemanais), resultados de exame físico, parâmetrosclínico-patológicos e pesos absoluto e relativo foramcomparados estatisticamente entre os grupos (SAS*Language: Reference, Version 9.3, SAS Institute Inc.,Cary, NC, USA) sendo 2 testes com cães utilizadosindividualmente como unidade experimental paraavaliar a hipótese de que não há diferenças entre osgrupos. Peso, consumação de alimento, parâmetros de 23 23

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:87http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/87Tabela 5. Achados clínicos em cães de grupos controle e em tratamento após o primeiro tratamentoObservação Número de cães afetados Análise ConclusãoIncidências dispersas de fezes Total observado: n=15 Número semelhante de animais afetados Não relacionadas com oanormais (solta, mucoide, vestígios Grupo controle: n=4 em cada grupo tratado comparados aos tratamento, nenhum eventode sangue fresco) controles; fezes anormais já observadas no Grupo 1X: n=5 adverso Grupo 3X: n=3 pré-tratamento em todos os grupos Grupo 5X: n=3Redução do escore de condição Total observado: n=8 Similar (grupo 3X, grupo 5X) ou inferior Não relacionadas com ocorporal (2 ou 2-3 numa escala de 1- Grupo controle: n=3 (grupo 1X) número de animais afetados em tratamento, nenhum evento5) Grupo 1X: n=0 comparação aos controles; nenhuma adverso Grupo 3X: n=3 relação dose-resposta Grupo 5X: n=2Queda de cabelo localizada / Total observado: n=6 Similar (grupo 1X, grupo 5X) ou inferior Não relacionadas com odermatite de contato / ferida Grupo controle: n=2 (grupo 3X) número de animais afetados em tratamento, nenhum evento Grupo 1X: n=3 comparação aos controles; nenhuma adverso Grupo 3X: n=0 relação dose-resposta Grupo 5X: n=1Vômito (de alimentos) após o Total observado: n=1 Caso único; sem relação dose-resposta; não Não relacionadas com oprimeiro tratamento, sem outros Grupo controle: n=0 observados após tratamento repetido tratamento, nenhum eventoachados clínicos Grupo 1X: n=1 adverso Grupo3X: n=0 Grupo 5X: n=0Gastroenterite com inapetência, Total observado: n=1 Caso único; sem relação dose-resposta; não Não relacionadas com oapatia, vômito Grupo controle: n=0 observados após tratamento repetido tratamento, nenhum evento Grupo 1X: n=0 adverso Grupo 3X: n=1 Grupo 5X: n=0 A administração de três tratamentos sequenciais em O fluralaner foi quantificável no plasma de todos osintervalos de 8 semanas produziu um período de 24 semanas cães tratados, confirmando a absorção e exposiçãode estudo com a máxima exposição sistêmica ao fluralaner em sistêmica.doses cinco vezes a dose máxima recomendada de tratamento.Para assegurar um pico de concentração plasmática em cães Através do estudo de 24 semanas, nenhuma diferençatratados, o fluralaner foi administrado na hora da refeição, já nas taxas de crescimento ou consumo de alimentos entreque a biodisponibilidade do fluralaner é maior em cães os grupos controle e em tratamento foi observada.alimentados [5]. Todos os cães consumiram a refeiçãooferecida parcial ou totalmente antes do primeiro tratamento Todos os cães foram cuidadosamente observados(dia 0) e consumiram totalmente a refeição oferecida antes do quanto a quaisquer achados clínicos durante as primeirassegundo e do terceiro tratamentos (dia 56 e 112). horas, seguidas do tratamento, para cobrir o rápido aumento da exposição sistêmica ao fluralaner [7] quando sintomas clínicos agudos poderiam estar mais visíveis.Tabela 6. Frequência de distribuição por grupo de cães com alterações registradas após o primeiro tratamentoPeríodo de tempo No de animais com alterações Análise Conclusão registradas por grupo Controle do grupo 1X grupo 3X grupo 5X grupoAvaliação clínica 2 5 1 1 Número de animais com alterações mais Não relacionado elevadas no grupo 1X do que nos ao tratamento controles, mas semelhantes aos controles no grupo 3X e 5X; nenhuma relação dose-respostaExame físico 4 4 4 3 Número de animais com alterações Não relacionado semelhantes aos controles; ao tratamento nenhuma relação dose-resposta24 24 © 2014 Wengenmayer et al.; licenciado por BioMed Central Ltd. Este é um artigo de acesso livre distribuíd sob os termos da Licença Atribuída a Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0), que permite o uso, distribuição e reprodução irrestrita em qualquer meio, desde que o trabalho original seja devidamente creditado. A dispensa da dedicatória ao domínio público da Creative Commons (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) aplica-se aos dados disponibilizados neste artigo, salvo indicação em contrário.

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:87http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/87Entretanto, nenhum achado clínico relativo ao tratamento Observaram-se diferenças estatisticamentecom fluralaner foi observado nessas avaliações seguidasdo tratamento com fluralaner nos dias 0, 56 e 112 ou significantes entre os grupos tratados e o grupo controledurante o restante do estudo. Dois eventos de vômitoocorreram durante o estudo [7], quando os sinais clínicos para alguns parâmetros de patologia clínica e peso deagudos estariam mais aparentes. Um cão tratado pelaprimeira vez na dose 1X vomitou 4 horas após o órgãos, e alguns poucos resultados em marcações detratamento. Esse cão não recebeu a segunda dose devidoà meia-vida de esvaziamento gástrico de tempo individuais caíram fora dos intervalos deaproximadamente 3 horas em cães alimentados [8]. Aabsorção da dose administrada foi confirmada por referência. Todos esses resultados foram avaliados comconcentrações plasmáticas dose-relacionadas defluralaner. Esse cão permaneceu no estudo e não mostrou base nos critérios de avaliação e não foram consideradasnenhum outro sinal clínico (incluindo vômito) no restantedo estudo. Outro cão desenvolveu sinais de gastroenterite clinicamente relevantes. Exames histopatológicos não(vômitos e diarreia) 5 dias após a administração daprimeira dose de fluralaner na dose 3X a do tratamento. encontraram diferenças significativas entre os gruposO cão foi tratado com antibióticos injetáveis(enrofloxacina) e os sinais clínicos se resolveram tratados e o grupo controle (dados não demonstrados).completamente durante os próximos quatro dias. Essessinais clínicos foram considerados não relacionados à A avaliação do presente estudo é consistente com aadministração de fluralaner devido ao intervalo de 5 diasentre o tratamento e o início dos sinais clínicos, assim conclusão apresentada pelas autoridades [4].como a rápida resolução subsequente dos sinais clínicosapós o tratamento antibacteriano. Esse cão não Conclusõesdemonstrou qualquer outro sintoma de gastroenterite epermaneceu no estudo. Esta avaliação detalhada da segurança do fluralaner, o mais novo antiparasitário sistêmico, após a administração Achados clínicos ocasionais foram observados em cães por via oral, em doses muito mais elevadas do que a doseprovenientes dos grupos tratados e de controle, durante o de tratamento recomendada, em intervalos de 8 semanas,estudo de 168 dias (Tabela 5). Os achados clínicos incluem não revelou quaisquer eventos adversos.leve incidência de fezes anormais (pequena quantidade defezes soltas, pequena quantidade de fezes mucoides/muco A administração por via oral de fluralaner,nas fezes, vestígios de sangue fresco), uma ligeira redução formulada como um comprimido mastigável para cãesno escore de condição corporal (2 ou 2-3 numa escala de 1- saudáveis, com doses de até 281,3 mg/kg em três5), ou leve injúria superficial da pele; todos esses achados ocasiões, a intervalos de 8 semanas, não levou aeram menores e nenhum afetou o estado geral de saúde dos quaisquer achados relacionados com o tratamento quecães. Essas observações foram consideradas não pudessem ser detectados através da observação clínicarelacionadas com o tratamento com fluralaner porque cuidadosa, avaliação clínico-patológica ou no exameocorreram com uma incidência semelhante ou menor nos macro ou microscópico. A administração por via oral degrupos tratados em comparação com o grupo controle e sem fluralaner na dose terapêutica máxima recomendada (56uma relação dose-resposta. Além disso, foram observadas mg/kg) é bem tolerada pelos cães e tem uma margem defezes anormais antes do primeiro tratamento em todos os segurança de mais de cinco vezes em cães saudáveis degrupos. Apesar de todos os cães terem sido tratados com oito semanas de idade ou mais e que tenham pesoendoparasiticidas, certas parasitoses intestinais como mínimo de 2 kg.coccidia ou giardia podem ter favorecido a ocorrência decasos leves de fezes anormais observadas no pré e pós- Conflito de interessestratamento. Com base na frequência da distribuição do FMW, MJA, RKAR e MCN são funcionários da Merck / MSD Saúdenúmero de cães com resultados anormais durante as Animal.avaliações clínicas ou exames médicos, não houve Contribuições dos autoresdiferenças relacionadas com a dose entre os grupos (Tabela FMW, MJA, RKAR e MCN foram os autores do delineamento do estudo,6). Os cães tratados foram considerados estatisticamente acompanharam o estudo e interpretaram os resultados. Todos ossignificantes devido à temperatura retal média menor do que autores revisaram e aprovaram a versão final do manuscrito.os cães-controle em seis marcações de tempo (dias 55 e 167 Agradecimentos- grupo 1X; dia 55, 111 e 167 - grupo 3X, e dia 55 - grupo Os autores agradecem a Charles River Laboratories Preclinical Services,5X). Esta diferença não foi considerada de relevância Ballina, Irlanda, devido ao auxílio prestado com o estudo.clínica, pois não havia sinais clínicos ou mudanças Recebido: 18 dez 2013 Aceito: 03 de março de 2014significativas em patologia clínica nos cães tratados, e as Publicado em: 7 de março de 2014temperaturas retais de todos os cães tratados estavam dentroda faixa observada em cães controle. Referências 1. Ozoe Y, Asahi M, Ozoe F, Nakahira K, Mita T: The antiparasitic isoxazoline A1443 is a potent blocker of insect ligand-gated chloride channels. Bioc hem Biophys Res Commun 2010, 391:744–749. 2. Rohdich N, Roepke RKA, Zschiesche E: A randomized, blinded, controlled and multi-centered field study comparing the efficacy and safety of Bravecto™ (fluralaner) against Frontline™ (fipronil) in flea- and tick-infested dogs. Parasit Vectors 2014, 7:83. 3. VICH GL 43: Target Animal Safety for Veterinary Pharmaceutical Products. Belgium; 2008. URL: http://www.vichsec.org/pdf/0708/GL43-st7.doc. 4. European Commission, Community register of veterinary medicinal products, Product information Bravecto: Annex 1 Summary of Product Characteristics. Bruxelles; 2014. URL: 25 25

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:87 http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/87 http://ec.europa.eu/health/documents/community- register/html/v158.htm. 5. Walther FM, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: The effect of food on the pharmacokinetics of oral fluralaner in dogs. Parasit Vectors 2014, 7:84. 6. Meyer DJ, Harvey JW: Veterinary Laboratory Medicine: Interpretation and Diagnosis. St. Louis: W. B. Saunders; 2004. 7. Kilp S, Ramirez D, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: Pharmacokinetics of fluralaner in dogs following a single oral or intravenous administration. Parasit Vectors 2014, 7:85. 8. Lester NV, Roberts GD, Newell SM, Graham JP, Hartless CS: Assessment of barium impregnated polyethylene spheres (BIPS) as a measure of solid-phase gastric emptying in normal dogs-comparison to scintigraphy. Vet Radiol Ultrasound 1999, 40:465–471. doi:10.1186/1756-3305-7-87 Cite esse artigo como: Walther et al.: Safety of fluralaner chewable tablets (Bravecto™), a novel systemic antiparasitic drug, in dogs after oral administration. Parasites & Vectors 2014 7:87. 26 26

Kilp et al. Parasites & Vectors 2014, 7:85http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/85PESQUISA Acesso abertoFarmacocinética do fluralaner em cães após administração únicapor via oral ou intravenosaSusanne Kilp1*, Diana Ramirez2, Mark J Allan1, Rainer KA Roepke1 e Martin C Nuernberger1ResumoHistórico: O fluralaner é um novo inseticida e acaricida sistêmico. O objetivo desses estudos foi investigar aspropriedades farmacocinéticas do fluralaner em cães Beagle após uma única dose administrada por via oral ouadministração intravenosa (IV).Métodos: Após a administração oral de 12,5; 25 ou 50 mg fluralaner/kg de peso corporal, formulada na forma decomprimidos mastigáveis ou administração IV de 12,5 mg/kg fluralaner formulados como solução IV a 24 Beagles,amostras de plasma foram recolhidas até 112 dias após o tratamento. As concentrações plasmáticas de fluralanerforam medidas usando HPLC-MS/MS. Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados por métodos nãocompartimentais.Resultados: Após a administração por via oral, as concentrações plasmáticas máximas (Cmax) foram atingidas dentrode 1 dia, em média. O fluralaner foi quantificável no plasma por até 112 dias após uma única dose administrada por viaoral e tratamento IV. A meia-vida aparente de fluralaner foi de 12-15 dias e o tempo médio de permanência foi de 15-20 dias. O volume aparente de distribuição de fluralaner foi de 3,1 L/kg, e sua taxa de depuração foi de 0,14 L/kg / dia.Conclusões: O fluralaner é prontamente absorvido após a administração de uma única dose por via oral, e apresentalonga meia-vida de eliminação, longo tempo de permanência média, volume aparente de distribuição relativamenteelevado, e uma taxa de depuração baixa. Estas características farmacocinéticas ajudam a explicar a atividadeprolongada de fluralaner contra pulgas e carrapatos em cães após uma única dose administrada por via oral.Palavras-chave: Fluralaner, Farmacocinética, Cão, Via Oral, Via IntravenosaHistórico O fluralaner é um tratamento inovador e altamente eficaz, e deO fluralaner é um novo insecticida e acaricida sistêmico longa duração ectoparasiticida em cães.formulado como um comprimido administrado por via oralmastigável que pode ser administrado a cães em intervalos Métodosde 12 semanas para uma eficaz e persistente eliminação de Os comprimidos mastigáveis contendo 13,64% (m/m)várias espécies de pulgas e carrapatos de cães [1,2]. de fluralaner foram formulados para administração por via oral a cães. O material de experimentação para a O fluralaner pertence a uma nova classe de produtos administração IV foi formulado como uma soluçãoquímicos com uma estrutura isoxazolina como característica com 2,5 mg fluralaner/mL em veículo de polietileno-essencial [2,3]. Ele tem um peso molecular de 556,29, um glicol (PEG) 200 (90% v/v) contendo 10% v/v de águalog Pow (coeficiente de partição octanol/água) de 5,35 e é para injeção.altamente ligado às proteínas plasmáticas. Machos e fêmeas saudáveis de cães da raça Beagle O fluralaner é um potente inibidor de canais de cloro foram alojados individualmente em baias com piso selado(ácido γ-aminobutírico (GABA) e L-glutamato) de neurônios, até 5 ou 6 semanas após a administração fluralaner (porcom maior seletividade pelos neurônios dos artrópodes do que via oral ou IV) a fim de evitar contaminação cruzadaos neurônios dos mamíferos [2,3]. In vivo, as investigações entre os animais. Em seguida, os cães foram alojados emmostraram que, após uma única administração por via oral a grupos de 3 do mesmo grupo de tratamento e sexo. Ocães, o fluralaner fornece atividade de eliminação de pulgas e ambiente foi monitorado continuamente, com umacarrapatos persistente durante 12 semanas [1]. temperatura de 15-21° C, umidade relativa de 40-70%, 10-20 renovações de ar por hora e um ciclo claro/escuro*Contato: [email protected] de luz fluorescente de 12 em 12 horas.1MSD Animal Health Innovation GmbH, Zur Propstei, 55270 Schwabenheim, Alemanha A informação completa sobre o autor está disponível no final do artigo. © 2014 Wengenmayer et al.; licenciado por BioMed Central Ltd. Este é um artigo de acesso livre distribuíd sob os termos da 27 Licença Atribuída a Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0), que permite o uso, distribuição e reprodução irrestrita em qualquer meio, desde que o trabalho original seja devidamente creditado. A dispensa da dedicatória ao domínio público da Creative Commons (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) aplica-se aos dados disponibilizados neste artigo, salvo indicação em contrário. 27

Kilp et al. Parasites & Vectors 2014, 7:85http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/85Os cães foram alimentados uma vez por dia no período da ácido fórmico a 0,1%. A solução resultante foi analisadamanhã, com uma dieta padrão e tiveram acesso ad libitum quantitativamente utilizando a extração de fase sólida(à vontade) à água. No dia da administração do fluralaner automatizada acoplada a cromatografia líquida compor via oral, os cães receberam metade de sua ração detecção por espectrometria de massa (linha SPE-HPLC-diária pouco antes do tratamento e o restante MS/MS). A gama linear do método para a determinaçãoimediatamente após o tratamento, porque a administração de fluralaner foi de 10,0-2500 ng/mL, com um limitede comprimidos mastigáveis contendo fluralaner inferior de quantificação (LIQ) de 10,0 ng/mL. Osfornecidos juntamente com a alimentação aumenta a sua parâmetros farmacocinéticos para fluralaner forambiodisponibilidade [4]. calculados usando métodos não compartimentais com o software WinNonlin® Professional Versão 5.3 (Pharsight Para determinar a taxa e a extensão da exposição Corporation, California, EUA). O pico de concentraçãosistêmica após a administração e proporcionalidade da plasmática (Cmax) e o tempo até a concentração máximadose por via oral, um estudo com grupos paralelos foi (Tmax) foram valores observados. A meia-vida derealizado com 3 grupos de tratamento. Os cães eliminação (t1/2) foi calculada por regressão linearreceberam 12,5; 25 ou 50 mg (dose alvo) fluralaner/kg utilizando a inclinação do segmento terminal daadministrado por via oral, com a dose média (25 mg/kg) concentração semilogarítmica no plasma em função dabaseada na dose mínima de tratamento recomendada curva de tempo. A área sob a concentração versus curva[1]. Parâmetros farmacocinéticos adicionais, como a de tempo (AUC) desde o tempo 0 até a últimataxa de depuração corporal total e volume de concentração mensurável (AUC (0 → t)) foi calculadadistribuição foram determinados em um estudo separado utilizando-se o método trapezoidal linear. A AUC doenvolvendo 6 Beagles para os quais foram tempo 0 extrapolada ao infinito (AUC (0 → ∞)) foiadministrados 12,5 mg/kg de fluralaner por infusão determinada como AUC (0 → t) + Ct / λz, em que Ct é alenta. Todos os cálculos de dose estão expressos em concentração de plasma no tempo t e λz é a constante demg/kg/fluralaner nas seções seguintes. taxa de primeira ordem associada com a parte terminal (log-linear) da curva. O volume de distribuição aparente Em ambos os estudos, os cães foram randomizados (Vz) após administração IV, com base na fase terminalpara os grupos de tratamento (3 cães por sexo por grupo), foi calculada como Dose/λz × AUC. A taxa de depuraçãoe agrupados pelo peso corpóreo para assegurar uma corporal total (Ct) após a administração IV foi calculadodistribuição equilibrada. Ambos os estudos foram como Dose/AUC. A biodisponibilidade (F%) por via oralcompatíveis com os princípios de boas práticas de foi calculada usando a média AUC (0 → ∞) como (AUClaboratório [5]. O trabalho foi conduzido em (0 → ∞) por via oral / AUC (0 → ∞) IV) X (Doseconformidade com a respectiva legislação nacional e IV/Dose oral) × 100. O tempo médio de permanênciaaprovados pelo Comitê de Ética em Experimentação (TMP) extrapolado para o infinito foi calculado como aAnimal de Harlan Laboratories S.A. razão entre AUMC / AUC; onde AUMC é a área sob a curva de primeiro momento. A proporcionalidade da dose Doses orais individuais foram determinadas com foi testada para os parâmetros de exposição Cmax e AUCbase nos pesos corporais individuais e a dosagem de (0 → t). Para este objetivo os valores dose-normalizadosfluralaner indicada nos comprimidos. Os cães receberam (dose nominal) foram analisados através de um modelocomprimidos individuais inteiros de fluralaner de 112,5 de regressão de análise de variância (ANOVA). Os testesmg, 250 mg ou 500 mg, ou uma combinação de foram bilaterais ao nível de significância de 0,05. Todoscomprimidos para se atingir uma dose próxima da dose- os dados são expressos como média aritmética ± DP, aalvo calculada. A administração da dosagem pela via menos que indicado de outra forma.oral foi facilitada pela colocação do comprimido naporção mais caudal da língua do cão. Volumes de doses Discussão e resultadosde injeção intravenosa foram determinados com base A cada um dos três grupos de seis cães (idade de 1-2nas massas corporais individuais e foram administradas anos; peso 7,8-11,4 kg) foi administrado fluralaner pora uma taxa de infusão constante ao longo de 5 minutos, via oral em uma das três doses-alvo (12,5; 25 ou 50utilizando um sistema de injeção automática (KDS mg/kg). As doses foram obtidas utilizando comprimidosModelo 200, KD Scientific Inc., Holliston, EUA). A taxa inteiros e, portanto, cada cão recebeu uma dose em tornode injeção por hora foi de aproximadamente 12 vezes o da dose alvo. Este foi um alcance de 12,0-14,6 mg/kgrespectivo volume de dose para garantir uma para uma dose alvo de 12,5 mg/kg, 25,0-28,8 mg/kg paraadministração completa dentro de 5 minutos. uma dose alvo de 25 mg/kg, e de 42,2-53,2 mg/kg para uma dose alvo de 50 mg/kg. Amostras de sangue foram coletadas da veia jugularem tubos de citrato de sódio momentos antes da Nenhum cão apresentou qualquer alteração clínica ouadministração da dose por via IV e às 2, 4 e 8 horas e 1, evento adverso após a administração por via oral de2, 3, 4, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 70, 77, 84, 91, fluralaner.98, 105 e 112 dias após a administração por via oral e 15min, 2, 4 e 8 horas, e 1, 2, 3, 4, 7, 14, 21, 28, 35, 49, 63, As concentrações plasmáticas de fluralaner atingiram77, 91, e 112 dias após a administração da dose por via o Cmax no prazo de 1 dia após a administração, em média,IV. O plasma foi colhido por centrifugação e armazenado e foram progressivamente diminuindo ao longo do tempo,congelado em frascos de plástico estéreis até a análise. Os com alguns picos secundários menores, o que podecães foram cuidadosamente observados durante 1 hora indicar a redistribuição ou recirculação entero-hepática.após a administração e diariamente desde então. Houve um aumento dose-dependente nos picos de As amostras de plasma foram extraídas porprecipitação da proteína com acetonitrila e diluída com28 28

Kilp et al. Parasites & Vectors 2014, 7:85http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/85concentração média plasmáticas. A porção terminal da eliminação lenta após a infusão IV. Estes parâmetroscurva de concentração no plasma em função do tempo foram similares aos valores determinados apósseguiu um curso quase paralelo; nos dois grupos de dose administração por via oral a diferentes taxas de dose,mais baixas, em uma mesma concentração com alta indicando que a cinética de eliminação parece servariabilidade inter-individual, e no grupo de dose elevada independente da dose e via de administração.a uma concentração mais elevada com menorvariabilidade inter-individual. O fluralaner pôde ser Como apenas os fármacos não ligados no sistemaquantificado no plasma (>10 ng/mL) por até 112 dias vascular estão disponíveis para eliminação pelos órgãosapós o tratamento, demonstrando uma longa persistência filtradores, o volume aparente de distribuição e taxa desistêmica (Figura 1). depuração são determinantes da meia-vida terminal [7-9]. Levando em conta o volume de água corporal total (cerca No grupo IV (12,5 mg/kg), uma eliminação muito lenta de 0,6 L/kg) de um cão [6], fluralaner tem umade fluralaner foi observada após a infusão de 5 minutos. distribuição relativa aparentemente elevada (Vz = 3,1Em todos os cães, as concentrações plasmáticas de L/kg) para os tecidos após a infusão IV, apesar do seufluralaner declinaram em função do tempo, com alguns elevado nível de ligação às proteínas do plasma.picos secundários, que podem indicar, por exemplo, aredistribuição ou recirculação entero-hepática. O fluralaner Para o fluralaner, presume-se que a principal via depôde ser quantificado no plasma por até 112 dias após a eliminação é provavelmente a hepática, porque aadministração, demonstrando uma longa duração sistêmica elevada proteína plasmática de ligação sugere que aapós a administração IV a cães (Figura 2). eliminação através da filtração renal é menor; portanto, a taxa de depuração plasmático pode ser assumido Os parâmetros farmacocinéticos não compartimentais como sendo equivalente aa taxa de depuração hepático.calculados a partir dos dados de concentração-tempo de Considerando-se um fluxo hepático sanguíneofluralaner são mostrados na Tabela 1. fisiológico no cão de cerca de 44,5 L/kg/dia [6,7] e depuração hepática de fluralaner de 0,14 L/kg/dia, a A taxa de depuração plasmático total médio de taxa de extração hepática é estimada como sendo baixafluralaner foi de 0,14 L/kg/dia e o volume de distribuição (0,3%). A taxa de depuração baixo, em conjunto com aaparente médio de fluralaner foi de 3,1 L/kg após a distribuição relativamente alta para os tecidos, podeminfusão IV. explicar a longa duração da biodisponibilidade sistêmica de fluralaner no cão. A meia-vida média (15 dias) e valores médios detempo de permanência (20 dias) sugerem um processo deFigura 1. As concentrações plasmáticas de fluralaner (média ± desvio padrão) em cães após única administração por via oral.Valores abaixo de LLOQ (10 ng/mL) foram ajustados em zero para cálculo de médias. 29 29

Kilp et al. Parasites & Vectors 2014, 7:85http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/85Figura 2. Concentrações plasmáticas de fluralaner (média ± desvio padrão) em cães após única administração IV.Valores abaixo de LLOQ (10 ng / mL) foram ajustados em zero para cálculo de médias. A biodisponibilidade da formulação administrada Conclusõespor via oral é ligeiramente maior em doses orais mais O fluralaner é rapidamente absorvido após a administraçãobaixas (34 ± 16%, 26 ± 11%, e 20 ± 8%, de 12,5; 25 e por via oral de dose única, e tem uma longa meia-vida de50 mg/kg, respectivamente). eliminação, longo tempo médio de permanência, volume aparente de distribuição relativamente elevado, e uma taxa de No entanto, não houve diferenças estatisticamente depuração baixa. Estas características farmacocinéticassignificativas entre grupos nos parâmetros de ajudam a explicar a atividade prolongada de fluralaner contraexposição dose-normalizada AUC (0 → t) e Cmax pulgas e carrapatos em cães após uma única dose(ANOVA, p = 0,165 para AUC (0 → t) e p = 0,206 administrada por via oral.para Cmax), indicando que não há provas contra ahipótese nula de proporcionalidade da dose de Declaração de conformidadefluralaner no intervalo de doses de 12,5 mg/kg a 50 Este estudo foi realizado na Espanha, depois de obtida amg/kg. aprovação das autoridades reguladoras competentes.Tabela 1. Parâmetros plasmáticos de farmacocinética do fluralaner em cães após única administração via oral ou via IV.Parâmetros Oral 12,5 mg/kg Oral 25,0 mg/kg Oral 50,0 mg/kg Intravenoso 12,5 mg/kg n=6 n=6 n=6 n=6Cmax (ng/mL) 2144 ± 860 3948 ± 1734 5419 ± 2086 7109 ± 908Tmaxa (dia) 1 (variação 0,08–2) 1 (variação 1–2) 1 (variação 0,17–3) n/aAUC(0-d112) (dia* ng/mL) 29665 ± 13858 46115 ± 18932 70171 ± 26412 87198 ± 11835AUC(0→∞) (dia*ng/mL) 29922 ± 13808 46416 ± 18929 70531 ± 26529 87779 ± 12004t1/2 (dia) 13 ± 1 12 ± 3 14 ± 1 15 ± 2TMP (dia) 19 ± 2 15 ± 4 17 ± 3 20 ± 3Ct (L/kg/dia) n/a n/a n/a 0,14 ± 0,02Vz (L/kg) n/a n/a n/a 3,1 ± 0,5aMediana, outros valores são média ± desvio padrão.n/a - não aplicável.30 30

Kilp et al. Parasites & Vectors 2014, 7:85http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/85Conflito de interessesTodos os autores, exceto DR, são funcionários da Merck / MSD SaúdeAnimal.Contribuições dos autoresSK, DR, MJA, RKAR & MCN foram os autores do delineamento doestudo e do protocolo, monitoraram o estudo e interpretaram osresultados. SK elaborou o manuscrito e todos os autores revisaram eaprovaram a versão final.AgradecimentosOs autores gostariam de agradecer a todo o pessoal envolvido nacondução do estudo e Rob Armstrong no auxílio da preparação domanuscrito.Detalhes dos Autores1MSD Animal Health Innovation GmbH, Zur Propstei, 55270Schwabenheim, Alemanha. 2Harlan Laboratories, Centro IndustrialSantiga, c / Argenters, 6, 08130 Santa Perpetua de Mogoda Barcelona,na Espanha.Recebido: 18 dez 2013 Aceito: 26 de fevereiro de 2014Publicado em: 7 de março de 2014Referências 1. Rohdich N, Roepke RKA, Zschiesche E: A randomized, blinded, controlled and multi-centered field study comparing the efficacy and safety of Bravecto™ (fluralaner) against FrontlineTM (fipronil) in flea- and tick-infested dogs. Parasit Vectors 2014, 7:83. 2. Gassel M, Wolf C, Noack S, Williams H, Ilg T: The novel isoxazoline ectoparasiticide fluralaner: selective inhibition of arthropod γ- aminobutyric acid- and L-glutamate-gated chloride channels and insecticidal/acaricidal activity. Insect Biochem Mol Biol 2014, 45:111–124. 3. Ozoe Y, Asahi M, Ozoe F, Nakahira K, Mita T: The antiparasitic isoxazoline A1443 is a potent blocker of insect ligand-gated chloride channels. Biochem Biophys Res Commun 2010, 391:744– 749. 4. Walther FM, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: The effect of food on the pharmacokinetics of oral fluralaner in dogs. Parasit Vectors 2014, 7:84. 5. OECD: Series on Principles of Good Laboratory Practice and Compliance Monitoring No.1. OECD Principles of Good Laboratory Practice (as revised in 1997). Paris: OECD Environmental Health and Safety Publications, ENV/MC/ CHEM(98)17; 1998. 6. Davies B, Morris T: Physiological parameters in laboratory animals and humans. Pharm Res 1993, 10(7):1093–1095. 7. Toutain PL, Bousquet-Mélou A: Clearance. J Vet Pharmacol Ther 2004, 27:415–425. 8. Toutain PL, Bousquet-Mélou A: Plasma terminal half life. J Vet Pharmacol Ther 2004, 27:427–439. 9. Toutain PL, Bousquet-Mélou A: Volumes of distribution. J Vet Pharmacol Ther 2004, 27:441–453.doi:10.1186/1756-3305-7-85 Cite este artigo como: Kilp et al.: Pharmacokinetics of fluralaner in dogs following a single oral or intravenous administration. Parasites & Vectors 2014 7:85. 31 31

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:86http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/86PESQUISA Acesso abertoSegurança do fluralaner, uma nova droga antiparasitáriasistêmica, em Collies MDR1(-/-) após administração por via oralFeli M Walther1*, Allan J Paul2, Mark J Allan1, Rainer KA Roepke1 e Martin C Nuernberger1ResumoHistórico: O fluralaner é um novo ectoparasiticida sistêmico para cães que proporciona longa ação e controle depulgas e carrapatos após uma única dose administrada por via oral. Este estudo investigou a segurança daadministração por via oral de fluralaner numa dose clínica 3 vezes maior que a esperada para o gene defeituoso daproteína de resistência a múltiplas drogas 1 (MDR1 (-/-) de Collies.Métodos: Dezesseis Collies homozigotos para a mutação de deleção de MDR1 foram incluídos no estudo. Oito Colliesreceberam um comprimido mastigável de fluralaner cada, a uma dose de 168 mg/kg; oito Collies receberam placebo eserviram como controle. Todos os Collies foram clinicamente observados por até 28 dias após o tratamento.Resultados: Nenhum evento adverso foi observado subsequente ao tratamento de Collies MDR1 (-/-) com fluralanerna dose clínica três vezes maior do que a esperada.Conclusões: Comprimidos mastigáveis de fluralaner são bem tolerados em Collies MDR1 (-/-) após administração porvia oral.Palavras-chave: Fluralaner, Bravecto™, Cão, Segurança, MDR1Histórico Mutações MDR1 foram detectadas em várias raças deO fluralaner é um novo produto inseticida e acaricida cães, como o Rough Collie e o Smooth Collie, Sheepdogadministrado sistemicamente que fornece eficácia de de Shetland, Pastor Australiano, McNab, Whippet de Pelolonga ação após a administração por via oral para cães. O Longo, Windhound, Sheepdog Inglês, Shepherd Inglês,fluralaner pertence a uma nova classe de compostos, a Border Collie e Wäller [5,6]. Mutações homozigóticasisoxazolinas. Estes compostos têm atividade em canais de (MDR1 (-/-)) estão associadas a um risco aumentado decloro acionados por ácido γ-aminobutírico (GABA) e neurotoxicidade para múltiplas drogas, levando a achadosglutamato com seletividade significativamente maior para clínicos tais como depressão, midríase, salivação, tremores,os neurônios do inseto do que para neurônios de ataxia e coma [3,7-10]. Embora cães MDR1 (-/-) nãomamíferos [1]. Um estudo de campo demonstrou que expressem uma glicoproteína P funcional, a variabilidadeuma dose única de fluralaner administrado por via oral a interindividual da sensibilidade é relatada [7,11]. Além dacães fornece, pelo menos, doze semanas de controle de baixa afinidade in vitro por receptores neuronais depulgas e carrapatos [2]. A longa duração de atividade mamíferos [1], o fluralaner não causou quaisquer sinais deoferece um tratamento mais conveniente sobre neurotoxicidade em um estudo anterior de alta dose detratamentos mensais de pulgas e carrapatos com uma segurança em cães saudáveis [12] nem em um estudo devantagem em potencial de complacência, reduzindo o campo [2]; este estudo foi delineado para confirmar arisco de doenças transmitidas por vetores. segurança da administração de fluralaner por via oral em cães com comprovada mutação MDR1 (-/-). Levando em Esse tratamento sistêmico será administrado aos cães que conta a variabilidade da susceptibilidade, o fluralaner foitransportam uma mutação de deleção do gene de Resistência administrado em sobredoses, ou seja, 3 vezes a dose clínicaMúltipla a Drogas (MDR1). Cães homozigóticos para a máxima esperada de 56 mg/kg [2].mutação não expressam uma glicoproteína P funcional [3],uma bomba de efluxo de droga altamente expressa na barreira Métodoshematoencefálica, que restringe a acumulação do fármaco no Esse estudo unicêntrico, randomizado, de grupossistema nervoso central através de um mecanismo de paralelos e cego para o pesquisador incluiu dezesseistransporte baseado em efluxos [4]. machos e fêmeas de Rough Collies saudáveis, de 1,7-4,0 anos de idade (média de 1,9 anos) e pesando 16-27 kg*Contato: [email protected] (média de 22 kg). Os cães eram de quatro ninhadas1MSD Animal Health Innovation GmbH, Zur Propstei, 55270 Schwabenheim,AlemanhaA informação completa sobre o autor está disponível no final do artigo. © 2014 Wengenmayer et al.; licenciado por BioMed Central Ltd. Este é um artigo de acesso livre distribuíd sob os termos da Licença Atribuída a Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0), que permite o uso, distribuição e reprodução irrestrita em qualquer meio, desde que o trabalho original seja devidamente creditado. A dispensa da dedicatória ao domínio público da Creative Commons (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) aplica-se aos dados disponibilizados neste artigo, salvo indicação em contrário.32 32

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:86http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/86diferentes, com três ninhadas diferentes por grupo de comprimidos foi previamente confirmada como parte doestudo. Todos os Collies eram homozigotos para a desenvolvimento do produto.mutação de deleção do MDR1, como confirmado portestes genéticos (www.vetmed.wsu.edu/VCPL). Comprimidos de fluralaner inteiros (1400 mg fluralaner/comprimido) e frações de comprimidos Este estudo foi realizado em Michigan, EUA, em foram dadas a cada cão para administrar a doseconformidade com a Lei de Bem-Estar Animal e calculada. A administração de frações desupervisionado pelo Departamento de Agricultura dos EUA comprimidos resultou num desvio máximo da dose(USDA), e a aprovação ética foi obtida antes do início do alvo de 0,5 mg fluralaner/kg de peso corporal. Após aestudo. O estudo foi aprovado pelo Comitê Institucional de administração do comprimido, uma pequenaCuidado e Uso Animal (Institutional Animal Care and Use quantidade de água foi disponibilizada para estimularCommittee, IACUC No CHK-13-0419). a deglutição. Cães controle permaneceram sem tratamento, cujo placebo foi administrado apenas com Collies saudáveis na avaliação física e clínico patológica água. No dia de tratamento (dia 0), os cães de ambosinicial foram alojados individualmente e alimentados com os grupos foram alimentados com uma porção deuma dieta comercial padrão nas doses recomendadas. Os dieta enlatada nos 30 minutos imediatamente antes doCollies foram alocados aleatoriamente para grupos de estudo tratamento e uma outra porção de ração enlatadausando o seguinte procedimento de randomização em bloco: imediatamente após o tratamento (cerca de 350os cães foram separados por sexo e classificados em ordem gramas no total). Os cães foram alimentados em tornocrescente de peso corporal; se dois cães tivessem pesos do tempo de tratamento para assegurar a altacorporais idênticos, eles seriam sub-classificados pelo número exposição sistêmica ao fluralaner, uma vez que acrescente do microchip. Os dois melhores cães dentro de cada biodisponibilidade do fluralaner é maior em cãessexo formaram um bloco que foi alocado aleatoriamente entre alimentados [13]. A ração diária normal foi oferecidacada um dos dois grupos de estudo, e o processo foi repetido uma hora após o tratamento.até que 4 machos e 4 fêmeas fossem alocados para cada grupode estudo. Um total de 8 Collies recebeu fluralaner e os outros Todos os animais foram observados por um8 receberam placebo, servindo como controle. técnico de saúde antes do tratamento e durante a primeira hora após a administração do fluralaner. As O intervalo de dose esperado para administração de avaliações clínicas foram realizadas por um médicofluralaner durante o uso clínico de rotina é entre 25 e 56 veterinário, que foi cego para o tratamento de cadamg/kg [2]. Esse estudo avaliou uma única administração cão, em 3, 6, 9, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54, 60 e 72por via oral de fluralaner em um comprimido mastigável horas após a administração. As avaliações focaramcom uma dose clínica 3 vezes mais alta que o esperado em, mas não eram limitadas a: comportamento,(168 mg fluralaner/kg de peso corporal). A dose salivação, vômitos, ataxia, tremor muscular, midríaseindividual para cada cão foi calculada com base no peso e reflexo pupilar. Entre 3 e 7 dias após tratamento oscorporal, determinada um dia antes do tratamento. Os cães foram observados quatro vezes por dia e, emcomprimidos utilizados foram os da formulação seguida, duas vezes por dia durante os 21 diascomercial final, destinada a ser comercializada como restantes do período de estudo por um técnico cegoBravecto™, produzido sob Boas Práticas de Fabricação para o tratamento de cada cão.(BPF). A distribuição homogênea de fluralaner em 33 33

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:86http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/86Exames físicos adicionais foram realizados por um Detalhes dos autoresveterinário (cego para o status de tratamento) antes da 1MSD Animal Health Innovation GmbH, Zur Propstei, 55270administração de fluralaner e nos dias 7, 14 e 28. O Schwabenheim, Alemanha. 2Illinois University College of Veterinarydiretor do estudo veterinário avaliou todos os parâmetros Medicine, 2001 S. Lincoln Ave, Urbana, IL 61802, EUA.registrados e relacionou os achados clínicos com otratamento de fluralaner. Todos os achados relacionados Recebido: 18 dez 2013 Aceito: 26 de fevereiro de 2014com o tratamento foram classificados como eventos Publicado em: 06 de março de 2014adversos. Amostras de sangue foram coletadas emintervalos de tempo durante o período de estudo para Referênciasmonitorar a exposição sistêmica ao fluralaner. Foramdeterminados pontos de tempo quanto à coleta de sangue 1. Ozoe Y, Asahi M, Ozoe F, Nakahira K, Mita T: The antiparasiticcom base nos dados farmacocinéticos anteriores [14] e as isoxazoline A1443 is a potent blocker of insect ligand-gatedamostras de sangue foram analisadas utilizando um chloride channels. Biochem Biophys Res Commun 2010, 391:744–método LC MS/MS validado (limite inferior de 749. quantificação = 10 ng/ml). 2. Rohdich N, Roepke RKA, Zschiesche E: A randomized, blinded,Discussão e resultados controlled and multi-centered field study comparing theTodos os cães tratados com fluralaner consumiram efficacy and safety of Bravecto™ (fluralaner) against Frontline™rapidamente a porção completa de alimento oferecida (fipronil) in flea- and tick-infested dogs. Parasit Vectors 2014, antes e logo após a administração do fluralaner. 7:83. O fluralaner foi quantificado no plasma dos cães 3. Mealey KL, Bentjen SA, Gay JM, Cantor GH: Ivermectin sensitivitytratados desde a primeira marcação de tempo após o in Collies is associated with a deletion mutation of the mdr1tratamento e por todo o tempo de estudo remanescente, gene. Pharmacogenetics 2001, 8:727–733. confirmando a exposição sistêmica relativa à dose(Figura 1). 4. Schinkel AH: The physiological function of drug-transporting P- glycoproteins. Semin Cancer Biol 1997, 8:161–170. Nenhum episódio de vômito, salivação excessiva ouquaisquer outros resultados foram observados durante a 5. Neff MW, Robertson KR, Wong AK, Safra N, Broman KW, Slatkin M, primeira hora de observação clínica após tratamento ou Mealey KL, Pedersen NC: Breed distribution and history ofdurante as frequentes avaliações clínicas realizadas ao canine mdr1-1∆, a pharmacogenetic mutation that marks thelongo de três dias após a administração de fluralaner. Os emergence of breeds from the Collie lineage. Proc Natl Acad Sciachados clínicos observados durante o período de estudo USA 2004, 101:11725–11730. incluíram um calo de apoio no jarrete medial de um cãono pré-tratamento, um cão que mordeu a própria língua 6. Geyer J, Doering B, Godoy JR, Leidolf R, Moritz A, Petzinger E: durante a alimentação no pré-tratamento, evidência de Frequency of the nt230(del4) MDR1 mutation in Collies andestro em três cães do grupo fluralaner e um episódio de related dog breeds in Germany. J Vet Pharmacol Therap 2005, taquicardia em um cão do grupo controle. Estes achados 28:545–551. clínicos eram menores e não relacionados com otratamento com fluralaner. 7. Paul AJ, Tranquilli WJ, Seward RL, Todd KS Jr, DiPietro JA: Clinical observations in Collies given ivermectin orally. Am J Vet Res Conclusões 1987, 48:684–685. Comprimidos mastigáveis de fluralaner são bem toleradosem Collies MDR1 (-/-) após a administração por via oral. 8. Geyer J, Doering B, Godoy JR, Moritz A, Petzinger E: Development of a PCR-based diagnostic test detecting a nt230(del4) MDR1Conflito de interesses mutation in dogs: verification in a moxidectin-sensitiveFMW, MJA, RKAR e MCN são funcionários da Merck / MSD Saúde Australian Shepherd. J Vet Pharmacol Therap 2005, 28:95–99. Animal.AJP é funcionário da Universidade de Illinois. 9. Geyer J, Klintzsch S, Meerkamp K, Woehlke A, Distl O, Moritz A, Petzinger E: Detection of the nt230(del4) MDR1 mutation inContribuições dos autores White Swiss Shepherd dogs: case reports of doramectinFMW, AJP, MJA, RKAR e MCN foram os autores do delineamento e toxicosis, breed predisposition, and microsatellite analysis. Jmonitoramento do estudo e interpretaram os resultados. Todos os Vet Pharmacol Therap 2007, 30:482–485. autores revisaram e aprovaram a versão final do manuscrito. 10. Barbet JL, Snook T, Gay JM, Mealey KL: ABCB1-1∆ (MDR1-1∆)Agradecimentos genotype is associated with adverse reactions in dogs treatedOs autores agradecem Cheri Colina Kennel & Supply, Stanwood, MI, with milbemycin oxime for generalized demodicosis. VetEUA, pelo auxílio com o estudo. Dermatol 2009, 20:111–114. 11. Martinez M, Modric S, Sharkey M, Troutman L, Walker L, Mealey K: The pharmacogenomics of P-glycoprotein and its role in veterinary medicine. J vet Pharmacol Therap 2008, 31:285–300. 12. Walther FM, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: Safety of fluralaner chewable tablets (Bravecto™), a novel systemic antiparasitic drug, in dogs after oral administration. Parasit Vectors 2014, 7:87. 13. Walther FM, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: The effect of food on the pharmacokinetics of oral fluralaner in dogs. Parasit Vectors 2014, 7:84. 14. Kilp S, Ramirez D, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: Pharmacokinetics of fluralaner in dogs following a single oral or intravenous administration. Parasit Vectors 2014, 7:85. doi:10.1186/1756-3305-7-86 Cite este artigo como: Walther et al.: Safety of fluralaner, a novel systemic antiparasitic drug, in MDR1(−/−) Collies after oral administration. Parasites & Vectors 2014 7:86.34 34

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:84http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/84PESQUISA Acesso abertoO efeito do alimento na farmacocinética do fluralaneradministrado por via oral em cãesFeli M Walther*, Mark J Allan, Rainer KA Roepke e Martin C NuernbergerResumoHistórico: O fluralaner é um novo ectoparasiticida sistêmico para cães, que fornece longo período de controle depulgas e carrapatos após uma única dose administrada por via oral. A farmacocinética da droga administrada por viaoral pode ser influenciada pela alimentação. Esse estudo investigou a influência da alimentação na farmacocinética dofluralaner.Métodos: Doze Beagles em jejum ou alimentados receberam uma única administração por via oral de 25 mgfluralaner/kg de peso corpóreo em um comprimido mastigável. As amostras de plasma foram coletadas em váriospontos de tempo no pós-tratamento para análise da concentração de fluralaner. As observações clínicas foramrealizadas em todos os cães em intervalos regulares durante todo o estudo.Resultados: O fluralaner foi prontamente absorvido em cães em jejum e alimentados após a administração de umadose de 25 mg/kg de peso corpóreo com uma média de Tmax semelhante para ambos os grupos. Em cãesalimentados, AUC e Cmax aumentaram em comparação com cães em jejum por um fator de 2,5 e 2,1, respectivamente.A diferença na AUC e Cmax entre os grupos em jejum e alimentado foi estatisticamente significativa. Não foramobservados eventos adversos após a administração por via oral de fluralaner nos cães em jejum ou alimentados.Conclusões: O fluralaner é amplamente absorvido em cães em jejum e alimentados. A administração de comprimidosmastigáveis de fluralaner com alimentos aumenta significativamente sua biodisponibilidade.Palavras-chave: Fluralaner, Cão, Farmacocinética, Efeito da Alimentação, Jejum A administração de comprimidos de fluralaner próximo ao momento de alimentação ou no momento da alimentaçãoHistórico pode ser uma opção para alguns donos de cães para facilitarO fluralaner é um novo ectoparasiticida sistêmico para cães, a administração da pastilha. Um efeito medicamento-que fornece longo período de controle de pulgas e carrapatos alimento não pode ser previsto através de base científica eapós uma única dose administrada por via oral. O fluralaner estudos específicos são necessários para investigar possíveispertence a uma nova classe de compostos, as isoxazolinas. efeitos [2-4]; portanto, este estudo foi realizado para avaliarUm estudo de campo demonstrou que uma única dose de o impacto dos alimentos sobre o perfil farmacocinético dosfluralaner administrada via oral a cães fornece pelo menos comprimidos mastigáveis de fluralaner.doze semanas de controle de pulgas e carrapatos [1]. O longoperíodo de ação oferece um tratamento mais conveniente do Métodosque o tratamento mensal do controle de pulgas e carrapatos, Este estudo foi realizado em conformidade com a legislaçãocom vantagem potencial de complacência, reduzindo o risco de proteção animal alemã e a aprovação ética foi obtidade doenças transmitidas por vetores. antes do início do estudo (pedido de autorização 23 177- 07/G 08-4-003). Os cães foram alojados individualmente em A alimentação afeta a fisiologia gastrointestinal e, baias com piso selado em até 3 dias após a administração doportanto, pode influenciar a farmacocinética de uma comprimido. Eles tiveram acesso à água ad libitum (àdroga, caso ela seja administrada concomitantemente vontade) durante todo o período do estudo e foramcom a refeição, através da redução, atraso, aumento, ou alimentados com uma dieta canina padrão (Boschaceleração de absorção; além disso, existem drogas que Tiernahrung GmbH & Co KG; ração seca; composição:não têm interação alimentar [2-4]. A farmacocinética Proteína 21%, gordura 6%, fibra bruta 7%, cinzas brutas 6%,alterada pode ter impacto na atividade clínica de umidade 10%). Doze Beagles saudáveis foram divididosfluralaner [3,4]. Por exemplo, um aumento na absorção entre grupos de estudo 'alimentados' ou 'em jejum', sendoem um animal alimentado pode conduzir a um classificados por sexo, de acordo com o peso corporalprolongado período de ação. crescente e sendo distribuídos alternadamente a um determinado grupo (Tabela 1).*Contato: [email protected] MSD Animal Health Innovation GmbH, Zur Propstei, 55270 Schwabenheim, Alemanha A informação completa sobre o autor está disponível no final do artigo. © 2014 Wengenmayer et al.; licenciado por BioMed Central Ltd. Este é um artigo de acesso livre distribuíd sob os termos da 35 Licença Atribuída a Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0), que permite o uso, distribuição e reprodução irrestrita em qualquer meio, desde que o trabalho original seja devidamente creditado. A dispensa da dedicatória ao domínio público da Creative Commons (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) aplica-se aos dados disponibilizados neste artigo, salvo indicação em contrário. 35

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:84http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/84Tabela 1. Parâmetros farmacocinéticos para avaliação de Estatísticas (SAS® Língua: Referência, versão 9.3, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA) foram calculadasfluralaner em grupos de cães em jejum e alimentados utilizando cada cão como unidade experimental. Grupo em Grupo jejum alimentado Discussão e resultados O fluralaner administrado por via oral foi prontamenteGênero Macho 4 3 absorvido (Tmax médio de 1 dia) em cães de ambos os grupos ‘em jejum’ e ‘alimentados’ e foi quantificável em ambos os Fêmea 2 3 grupos ao longo de todo o período de estudo (Figura 1). A proporção AUC0-91d calculada entre os dois grupos foi dePeso Corporal (kg) Média 14,0 13,5 2,5 e a proporção Cmax foi de 2,1; AUC0-91d e Cmax foram significativamente mais elevados no grupo alimentado Variação 12,2 – 16,6 12,0 – 15,6 (Quadro 2). Em contraste, Tmax não foi significativamente diferente entre os dois grupos de estudo (Tabela 2). Muitos Todos os cães foram tratados uma vez por medicamentos que mostram o aumento da absorção emadministração via oral com comprimidos mastigáveis interações com alimentos também apresentam absorçãocontendo fluralaner na dose de 25 mg fluralaner/kg de reduzida [2]. No presente estudo, a semelhança entre ospeso corporal no dia 0. Os comprimidos mastigáveis grupos ‘alimentado’ e ‘em jejum’ no tempo para atingir asforam cortados para atingir a dose alvo individual. Os concentrações plasmáticas máximas indica que a absorçãocomprimidos foram colocados sobre o dorso da língua e a de fluralaner, e o início de efeito parasiticida, não é atrasadodeglutição foi estimulada com uma pequena quantidade através da alimentação.de água da torneira. Alimentos também podem afetar a distribuição, o Ambos os grupos foram submetidos a jejum alimentar metabolismo e a eliminação de drogas [3,4]. No entanto,por 25 horas antes da administração de fluralaner. Aos o padrão semelhante de concentração no plasma emcães do grupo ‘alimentado’ foi oferecida a metade da ambos os grupos do presente estudo (Figura 1) indica queração diária normal, 15 minutos antes da administração o estado de alimentação do cão não tem nenhum efeitode fluralaner, e a metade restante foi oferecida para estes sobre a subsequente distribuição, o metabolismo oucães imediatamente após a administração. Cães do grupo excreção de fluralaner.‘em jejum’ receberam por administração via oralcomprimidos mastigáveis de fluralaner sem que fossem O grau de interação droga-alimento pode ser afetadoalimentados e permaneceram em jejum por mais de 8 pela formulação de fármaco [2,3]. No entanto, ahoras. Os cães foram observados em intervalos regulares formulação de comprimidos utilizados no presente estudopara quaisquer dados clínicos ao longo do estudo. O é equivalente à formulação desenvolvida para o produtoveterinário supervisor do estudo avaliou todos os achados comercial final Bravecto™; portanto, os resultados doclínicos relacionados com o tratamento de fluralaner. presente estudo são considerados representativos daTodos os resultados relacionados com o tratamento foram interação droga-alimento para o Bravecto™.classificados como eventos adversos. Para alguns fármacos, a biodisponibilidade aumenta As amostras de sangue para determinação de de acordo com o aumento do teor de gorduras, enquantoconcentração plasmática de fluralaner foram coletadas antes que a fibra dietética pode reduzir a disponibilidade deda administração dos comprimidos e às 2, 4 e 8 horas, e, em drogas [3]. Para este estudo, uma dieta comercial deseguida, 1, 2, 3, 4, 7, 14, 21, 28, 42, 56, 70, 84, e 91 dias baixo teor de gordura e elevado teor de fibra foi utilizadaapós a administração do comprimido. As marcações de com a expectativa de que iria potencialmente minimizar otempo da coleta de sangue foram selecionadas com base em efeito da dieta sobre a disponibilidade do fluralaner. Nodados farmacocinéticos anteriores (observações não entanto, o efeito da alimentação com o fluralaner pode serpublicadas), para registro da rápida absorção inicial, semelhante para outros tipos de dietas.redistribuição e eliminação prolongada durante 13 semanasapós o tratamento administrado por via oral. As O momento da alimentação em relação ao tratamentoconcentrações de fluralaner no plasma sanguíneo foram administrado por via oral pode impactar as interaçõesdeterminadas utilizando-se extração automatizada em fase medicamento-alimento [3]. No presente estudo, todos ossólida acoplada a cromatografia líquida com espectrometria cães do grupo 'alimentado' consumiram totalmente ade massa (On-SPE - HPLC/MS/MS; limite inferior de porção inicial da ração diária antes da administração doquantificação de 5ng/ml). O método bioanalítico foi fluralaner, e também consumiram rapidamente a raçãovalidado com base nas diretrizes regulatórias [5,6]. restante, oferecida após a administração. Portanto a administração recomendada para Bravecto™ comprimidos A avaliação farmacocinética do fluralaner foi baseada mastigáveis está no - ou em torno do - momento dana concentração plasmática do composto de origem para alimentação.a área sob a curva desde o tempo 0 até o último ponto deamostragem associada a uma concentração quantificável A administração concomitante de um fármaco com(91 dias após a administração, AUC0-91d), concentração alimento pode reduzir ou aumentar a variabilidadeplasmática máxima (Cmax) e tempo para Cmax (Tmax). Os interindividual das concentrações plasmáticas de drogaparâmetros farmacocinéticos foram calculados usando [3]. No presente estudo, ambos AUC e Cmax apresentarammétodos não compartimentados (WinNonlin 5.2.1, menores desvios-padrão no grupo alimentado, indicandoPharsight, Mountain View, Califórnia). O AUC0-91d foi variabilidade individual menos pronunciada ecalculado usando o método trapezoidal linear. proporcionando uma razão adicional para recomendar a coadministração com alimentos. O efeito dos alimentos sobre a farmacocinética dofluralaner foi calculado pela comparação das médias deAUC0-91d e Cmax de ambos os grupos, de acordo com osseguintes índices: AUC0-91d (Alimentado) / AUC0-91d(em jejum) ou Cmax (Alimentado) / Cmax (em jejum).36 36

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:84http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/84 Este estudo não avaliou o impacto sobre a como um comprimido mastigável e alguns donos defarmacocinética do fluralaner com menores quantidades cães podem optar pela facilidade de administração no -de alimento do que aquela ração total diária no ou próximo do - momento da alimentação. Osmomento do tratamento; no entanto, é possível que a resultados deste estudo mostram que o fluralaner écoadministração com quantidades menores de alimentos rapidamente absorvido tanto nos cães em jejum quantotambém vá aumentar a biodisponibilidade do fluralaner. nos alimentados e é detectável no plasma por mais de 12 semanas em ambos os grupos. A administração por No presente estudo, não foram observados achados via oral de fluralaner para os cães, juntamente com aclínicos em cães no pós-tratamento em ambos os grupos, sua refeição completa, resultou na total exposição àindicando um provável evento adverso; portanto, suspeita- droga ao longo dos 91 dias subsequentes, que foi 2,5se de que o aumento da biodisponibilidade do fluralaner vezes maior do que em cães tratados durante o jejum.não esteja associado com um maior risco de toxicidade, Do mesmo modo, a concentração plasmática máximacomo tem sido sugerido para outros compostos [4]. Em foi 2,1 vezes maior em cães alimentados comparadosapoio a isso, a segurança do fluralaner após a com cães em jejum.administração por via oral em alta dosagem foiexaustivamente investigada, confirmando uma margem de A administração no momento da alimentação maissegurança elevada para o fluralaner [7]. do que duplica a biodisponibilidade do fluralaner e essa diferença é estatisticamente significante. PorConclusões estas razões, é recomendada a administração deO fluralaner é um novo e potente inseticida e acaricida comprimidos mastigáveis de fluralaner no momentocom uma ação mais prolongada em cães do que outros da alimentação.produtos comerciais disponíveis atualmente aplicadospor via oral ou tópica [1]. O fluralaner é formuladoTabela 2. Parâmetros farmacocinéticos de fluralaner após a administração por via oral (25 mg/kg) a cães em jejum oualimentadosParâmetro Unidade Grupo em jejum Grupo alimentado Valor P Razão (jejum/alimentado) Média ± DP Média ± DP (média) (média)Cmax (ng/mL) 1591 ± 708 3377 ± 669 0,0015 2,1 (1037–2683) (2325 – 4326)Tmax (dia) 1,3 ± 1,2 1,4 ± 1,3 0,8096 - (0,17 – 3,00) (0,33 – 4,00)AUC0-91d (dia*ng/mL) 31369 ± 20654 78785 ± 11440 0,0022 2,5DP: Desvio Padrão (14316 – 63557) (60862 – 91854) 37 37

Walther et al. Parasites & Vectors 2014, 7:84 http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/84 Conflito de interesses FMW, MJA, RKAR e MCN são funcionários da Merck / MSD Saúde Animal. Contribuições dos autores FMW, MJA, RKAR e MCN foram os autores do delineamento do estudo, acompanharam o estudo e interpretaram os resultados. Todos os autores revisaram e aprovaram a versão final do manuscrito. Agradecimentos Os autores agradecem a todo o pessoal MSD Animal Health envolvidos no estudo. Recebido: 18 dez 2013 Aceito: 26 de fevereiro de 2014 Publicado em: 5 de março de 2014 Referências 1. Rohdich N, Roepke RKA, Zschiesche E: A randomized, blinded, controlled and multi-centered field study comparing the efficacy and safety of Bravecto™ (fluralaner) against FrontlineTM (fipronil) in flea- and tick-infested dogs. Parasit Vectors 2014, 7:83. 2. Welling PG: Effects of food on drug absorption. Annu Rev Nutr 1996, 16:383–415. 3. Singh BN: Effects of food on clinical pharmacokinetics. Clin Pharmacokinet 1999, 37:213–255. 4. Schmidt LE, Dalhoff K: Food-drug interactions. Drugs 2002, 62:1481–1502. 5. FDA: Guidance for Industry, Bioanalytical Method Validation. Rockville: U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research (CDER), Center for Veterinary Medicine (CVM); 2001. 6. EMEA: Guidelines for the Conduct of Pharmacokinetic Studies in Target Animal Species. London: The European Agency for the Evaluation of Medicinal Products/Committee for Veterinary Medicinal Products, EMEA/CVMP/133/ 99-Final; 1999. 7. Walther FM, Allan MJ, Roepke RKA, Nuernberger MC: Safety of fluralaner chewable tablets (Bravecto™), a novel systemic antiparasitic drug, in dogs after oral administration. Parasit Vectors 2014, 7:87. doi:10.1186/1756-3305-7-84 Cite este artigo como: Walther et al.: The effect of food on the pharmacokinetics of oral fluralaner in dogs. Parasites & Vectors 2014 7:84.38 38

Rohdich et al. Parasites & Vectors 2014, 7:83http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/83PESQUISA Acesso AbertoEstudo de campo randomizado e cego, controlado e multicêntricocomparando a eficácia e segurança do Bravecto™ (fluralaner) como Frontline™ (fipronil) em cães infestados por pulgas e carrapatosNadja Rohdich*, Rainer KA Roepke and Eva ZschiescheResumoHistórico: O fluralaner, uma nova molécula da classe das isoxazolinas, possui potente atividade inseticida e acaricida epode ser administrada por via oral de modo seguro a cães.Métodos: Um estudo randomizado e cego para o pesquisador, multicêntrico comparou a eficácia do controle depulgas e carrapatos para cães durante um período de 12 semanas com uma única dose administrada por via oral deBravecto™ (fluralaner), formulado como um comprimido mastigável ou com três tratamentos tópicos sequenciais deFrontline™ (fipronil). Cada cão foi a unidade experimental para carrapatos e as famílias foram a unidade experimentalpara pulgas. Um total de 108 cães infestados por carrapatos foram tratados com Bravecto™ (fluralaner) e 54 cãesinfestados por carrapatos foram tratados com Frontline™ (fipronil). Cães em 115 domicílios infestados por pulgasreceberam Bravecto™ (fluralaner) e cães em 61 domicílios infestados por pulgas receberam Frontline™ (fipronil). Acontagem de pulgas e carrapatos foi realizada em todos os cães nas semanas 2, 4, 8 e 12 após o tratamento inicial e aeficácia foi calculada como a porcentagem de redução média na contagem de carrapatos ou pulgas em cada ponto detempo em comparação com a contagem média do início do pré-tratamento para cada grupo. Além disso, foramdeterminados os percentuais de domicílios isentos de ácaros e livre de pulgas.Resultados: Nas semanas 2, 4, 8 e 12, a eficácia de controle de pulgas em domicílios tratados com Bravecto™(fluralaner) foi de 99,2%, 99,8%, 99,8% e 99,9%, respectivamente, enquanto com Frontline™ (fipronil), a eficácia foi de94,1%, 93,0 %, 96,0%, e 97,3%, respectivamente. A eficácia do controle de carrapatos com Bravecto™ (fluralaner) sobrecães tratados nas semanas 2, 4, 8 e 12 foi de 99,9%, 99,9%, 99,7% e 100%, respectivamente, e a eficácia Frontline™(fipronil) foi de 97,6%, 93,8%, 100% e 100%, respectivamente. Em cada ponto de tempo, dos cães com sinais deDermatite Alérgica a Picada de Pulga (DAPP) no início do estudo, 85,7% do grupo Bravecto™ (fluralaner) e 55,6% dogrupo Frontline™ (fipronil) não demonstraram sinais clínicos de DAPP até a conclusão do estudo.Conclusão: Bravecto™ (fluralaner), administrado uma única vez por via oral para cães em uma pastilha mastigável, foialtamente eficaz durante 12 semanas contra pulgas e carrapatos em cães de propriedade privada e foisignificativamente não-inferior (carrapatos) e superior (pulgas) em comparação com a administração tópica deFrontline™ (fipronil), administrada por 3 vezes seguidas.Palavras-chave: Pulgas, Carrapatos, Bravecto™ (fluralaner), Isoxazolina, Frontline™ (fipronil), Eficácia, Estudo de Campo, Cão*Contato: [email protected] Animal Health Innovation GmbH, Zur Propstei, 55270 Schwabenheim,AlemanhaA informação completa sobre o autor está disponível no final do artigo. © 2014 Wengenmayer et al.; licenciado por BioMed Central Ltd. Este é um artigo de acesso livre distribuíd sob os termos da 39 Licença Atribuída a Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0), que permite o uso, distribuição e reprodução irrestrita em qualquer meio, desde que o trabalho original seja devidamente creditado. A dispensa da dedicatória ao domínio público da Creative Commons (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) aplica-se aos dados disponibilizados neste artigo, salvo indicação em contrário.. 39

Rohdich et al. Parasites & Vectors 2014, 7:83http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/83Histórico de cuidados intensivos veterinários, qualquer cão que tivesse recebido tratamento ectoparasiticida anterior (nosNovos e eficazes tratamentos de infestações últimos 7 a 30 dias, dependendo da duração do efeito doectoparasitárias de animais de companhia são importantes tratamento), uma cadela grávida ou amamentando, maispois estes parasitas podem se tornar tolerantes às opções de de 5 cães, ou outras espécies de animais que pudessemtratamento existentes e têm o potencial para desenvolver abrigar pulgas e/ou carrapatos (por exemplo, gatos,resistência [1]. Veterinários e proprietários de animais coelhos, porcos-da-índia) que partilhassem da mesmatambém estão procurando por tratamentos mais duradouros área de descanso; se houvesse sido aplicado inseticida oue eficazes para incluir em seus protocolos de controle de regulador de crescimento de insetos no ambienteectoparasitas. Eles doméstico nos dois meses anteriores; ou se o cãotêm preocupações com irritação e lesões causadas por precisasse gastar um tempo considerável em hotel oupulgas e carrapatos e os riscos que estes parasitas abrigo de animais durante o período de estudo. Os donosapresentam como vetores de doenças infecciosas. Além de cães foram informados sobre o protocolo do estudo edisso, a baixa adesão do proprietário aos atuais obrigados a assinar um termo de consentimento,ectoparasiticidas de recomendação mensal é uma das permitindo a inscrição de seu(s) cão(es) no estudo.preocupações no controle de re-tratamento [2]. Os cães foram distribuídos aleatoriamente, utilizando O fluralaner é um membro da classe das isoxazolinas, uma lista gerada por computador, para receber Bravecto™uma nova classe de novos medicamentos antiparasitários (fluralaner, 25-56 mg/kg de peso corporal, dose única) ourepresentando segurança e eficácia para os novos produtos um tratamento controle positivo de Frontline™ (fipronil,insecticidas e acaricidas na gestão de infestações por ≥6,7 mg/kg por três vezes consecutivas) em uma razão deectoparasitas em cães e gatos [3]. Foi comprovado que o 2:1 de fluralaner : fipronil. Todos os cães da mesmafluralaner possui uma poderosa eficácia contra ectoparasitas família foram tratados usando o mesmo produto. Ume é seguro na administração por via oral a cães [4]. Os testes exame clínico incluindo uma avaliação descritiva dosin vitro mostraram que o fluralaner é um inibidor altamente exames de pele e pelo para documentar quaisquer lesõespotente dos canais de cloro GABAergicos específicos de de pele, possivelmente relacionados com a DAPP, foiartrópodes, com uma atividade inibitória menos potente, realizado. Uma contagem parasitária inicial foi realizadamas ainda assim significativa, sobre os canais de cloro por meio da Associação Mundial para o Avanço daativados pelo pelo glutamato de artrópodes e sua ligação ao Parasitologia Veterinária (World Association for thereceptor foi 5-236 vezes melhor do que o fipronil aos canais Advancement of Veterinary Parasitology, WAAVP) pelode cloro GABAergicos de artrópodes [5]. Esta diferença método de contagem por escovação [6], seguida pelapotencial entre receptores poderia se traduzir em maior administração do tratamento inicial no hospitaleficácia para o fluralaner sobre fipronil para o controle de veterinário. A todos os cães que receberam o tratamentoectoparasitas em condições de campo. administrado por via oral Bravecto™ (fluralaner) ofereceu-se inicialmente o comprimido de forma Este estudo apresenta resultados de um rigoroso estudo voluntária. Se o comprimido fosse recusado, os cãesde campo cego, feito através de Boas Práticas Clínicas receberiam o comprimido diretamente na boca.(BPC), comparando o Bravecto™ (fluralaner) com umcontrole positivo (fipronil) sob condições típicas de prática Todos os cães permaneceram na casa do proprietário eveterinária. Este estudo avaliou se Bravecto™ (fluralaner) é foram alimentados com a dieta habitual, com acesso a águatão eficaz quanto o tratamento controle positivo, pelo menos de acordo com a sua rotina normal. Tosa, banho e nataçãoestatisticamente (análise de não-inferioridade). foram permitidos durante o estudo, mas não 3 dias antes de uma visita programada ou até 2 dias após a aplicação dosMétodos tratamentos. Participantes veterinários e proprietários foramEste foi um estudo de eficácia de campo multicêntrico, responsáveis por coletar mais detalhes sobre quaisquerrandomizado, conduzido em clínicas veterinárias na suspeitas de eventos adversos ao longo do estudo.Alemanha, França e Espanha, que incluíram cães deproprietários de qualquer raça ou sexo. O estudo foi iniciado Procedimentos regulares de acompanhamento nas 2,em agosto de 2011 e foi concluída em fevereiro de 2012. Os 4, 8 e 12 semanas após o tratamento inicial incluiramveterinários que realizaram avaliações clínicas e contagem reexames de cães para documentar o estado de saúde ede parasitas foram cegos para a distribuição do tratamento quaisquer alterações nas lesões de pele e de pelo para osdos cães. O delineamento do estudo usou cada cão como cães que originalmente apresentaram DAPP, seguido pelaunidade experimental para análise estatística de infestações contagem de parasitas. Nas semanas 4 e 8, os cães dode carrapatos e a residência como unidade experimental para grupo controle positivo receberam repetição doanálise de infestações por pulgas. tratamento após estes procedimentos. Os carrapatos foram removidos cuidadosamente com uma pinça; Para participar do estudo, os cães tinham que ter uma contados; e categorizados como “vivo” ou “morto”;pulga ou carrapato visível (ou ambos) no exame inicial, carrapatos foram posteriormente enviados para acom a observação de pelo menos 4 ectoparasitas identificação microscópica da espécie.individuais. Os cães também precisavam ter umtemperamento apropriado que permitisse as manipulações A redução percentual de carrapatos em cãesnecessárias para a contagem de parasitas; ter 10 semanas inicialmente infestados e a porcentagem de redução dede idade ou mais, pelo menos 2 kg de peso corporal, e pulgas em domicílios infestados foram calculados para asserem suficientemente saudáveis para seguir o horário de semanas 2, 4, 8, e 12 em comparação com os valoresestudo. Os cães seriam inelegíveis se houvesse, na iniciais para ambos os tratamentos de acordo com afamília, um animal gravemente doente que necessitasse seguinte fórmula:40 40

Rohdich et al. Parasites & Vectors 2014, 7:83http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/83���������%� = �̅�������������� � � �̅�������������� . 100 Tabela 1. Demografia da população de cães inclusos no �̅�������������� estudo Bravecto™ Frontline™ (fluralaner) (fipronil)onde X pré-tratamento é o número da média geométrica de n= 325 n=154pulgas ou carrapatos vivos no início (dia 0) e X pós-tratamentoé o número da média geométrica de pulgas ou carrapatos Comprimento do pelovivos após o tratamento (semanas 2, 4, 8 e 12). Curto 139 (42,8%) 66 (42,9%) Para cada visita, a não-inferioridade do percentualde domicílios sem parasitas foi investigada no grupo Médio 137 (42,2%) 64 (41,6%)Bravecto™ (fluralaner) em comparação com o grupoFrontline™ (fipronil). O teste Farrington-Manning [7] Longo 49 (15,1%) 24 (15,6%)de não-inferioridade para a diferença de risco foiutilizado com um nível de significância de α = 0,025 Condições de vidae uma diferença tolerada de δ = 0,15. Dentro de casa 84 (25,8%) 44 (28,6%) Todos os dados para análise estatística (SASInstitute Inc., Cary, NC, USA, versão 9.2) foram Fora de casa 155 (47,7%) 59 (38,3%)inseridos em um computador usando a técnica dedupla entrada de dados com posterior comparação dos Dentro e fora de casa 86 (26,5%) 51 (33,1%)conjuntos de dados e uma verificação deplausibilidade para valores faltantes, erros de entrada, Número de cães na residênciae entradas não plausíveis. n = 144 n = 70 1 76 (52,8%) 32 (45,7%) 2 19 (13,2%) 14 (20,0%) 3 11 (7,6%) 8 (11,4%) 4 11 (7,6%) 8 (11,4%) 5 27 (18,8%) 8 (11,4%)Resultados 41,8 (intervalo de 0-254 por cão) e 38,1 (intervalo de 0- 176 por cão) nos grupos Bravecto™ (fluralaner) eA população do estudo incluiu cães em domicílios na Frontline™ (fipronil), respectivamente (Tabelas 2 e 3).Alemanha, França e Espanha. No geral, 176 domicíliosinfestados por pulgas (115 tratados com Bravecto™ A eficácia de controle de pulgas em domicílios foi maior(fluralaner) e 61 tratados com Frontline™ (fipronil)) e 162 em cães tratados com Bravecto™ (fluralaner) e foi de 99,2%cães infestados por carrapatos (108 tratados com ou mais em todos os momentos (Tabela 4). A eficácia deBravecto™ (fluralaner) e 54 com Frontline™ (fipronil)) controle de carrapatos nos indivíduos foi maior em cãescompletaram o estudo. Os cães tinham uma idade média tratados com Bravecto™ (fluralaner) nas semanas 2 e 4. Nade 4,6 anos (variação de 10 semanas a 15 anos) e um semana 8, a eficácia com Frontline™ (fipronil) foi ligeiramentepeso médio de 19,9 kg (intervalo 2,2-59,8 kg); 46% eram superior, 100% em comparação com 99,7% para Bravecto™machos (13% foram castrados) e 54% eram fêmeas (17% (fluralaner). Ambos os grupos de tratamento tiveram umaforam castradas). As raças representadas por mais de dez eficácia de 100% na semana 12 (Tabela 5).cães foram: Grande Hound Anglo-francês, Setter Inglês,Greyhound Espanhol, Spaniel Bretão, Beagle, Yorkshire O percentual de domicílios livres de pulgas (topo daTerrier, Dachshund, Basset Fulvo da Bretanha, Cavalier tabela 6, superioridade com p <0,025) foi maior apósKing Charles Spaniel e Maltês. Características adicionais tratamento com Bravecto™ (fluralaner) em comparaçãoda população foram registradas (Tabela 1). com Frontline™ (fipronil) em todas as marcações de tempo. O percentual de domicílios com cçaes tratados No início do estudo (dia 0), a média da contagem dos com Bravecto™ (fluralaner) que estavam livres decarrapatos dos cães foi de 6,5 (intervalo 1-57) e 6,1 carrapatos foi maior em todos os momentos em(intervalo 1-60) em cães nos grupos Frontline™ (fipronil) comparação com domicílios tratados com Frontline™e Bravecto™ (fluralaner), respectivamente. As espécies de (fipronil) (parte inferior da tabela 6, não-inferioridadecarrapato mais prevalentes identificados no início (dia 0) com p <0,0024), exceto para a semana 12, quando ambosforam os do grupo Rhipicephalus sanguineus (34,8%), os grupos estavam 100% livres de carrapatos.seguido por Ixodes hexagonus (25,4%), Ixodes ricinus(25,2%), Dermacentor reticulatus (9,6%), larvas de Havia 35 (10,8%) cães tratados com Bravecto™Ixodes spp. (4,0%), ninfas de Ixodes spp. (1,0%). A (fluralaner) e 18 (11,7%) tratados com Frontline™média de contagem da relação pulgas/ambiente foi de (fipronil) que tinham sinais clínicos de DAPP no momento de inclusão ao estudo.Tabela 2. Infestações por pulgas no ambiente doméstico antes do tratamento com Bravecto ™ (fluralaner) ou Frontline ™(fipronil) Alemanha França Espanha No. de Rs* No. de pulgas No. de Rs* No. de pulgas No. de Rs* No. de pulgas (média ± DP) (média ± DP) (média ± DP)Bravecto™ (fluralaner) 35 695 52 3056 28 1059 (19,9 ± 23,0) (58,8 ± 92,7) (37,8 ± 38,2)Frontline™ (fipronil) 17 261 27 1280 17 783 (15,4 ± 17,2) (47,4 ± 59,2) (46,1 ± 44,0)*Rs = ResidênciasDP = Desvio Padrão 41 41

Rohdich et al. Parasites & Vectors 2014, 7:83http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/83Tabela 3. Infestações de carrapatos em cães antes do tratamento com Bravecto™ (fluralaner) ou Frontline™(fipronil)Bravecto™ (fluralaner) No. de Rs* Alemanha No. de Rs* França No. de Rs* EspanhaFrontline™ (fipronil) 26 No. de carrapatos 16 No. de carrapatos 66 No. de carrapatos 13 (média ± DP) 11 (média ± DP) 30 (média ± DP) 186 (7,2 ± 8,3) 164 353 (10,3 ± 16,7) (5,3 ± 2,9) 73 (5,6 ± 7,9) 98 160 (8,9 ± 17,4) (5,3 ± 3,1)No grupo Bravecto™ (fluralaner), 85,7% (30 de 35) destes O Bravecto™ (fluralaner) apresentou resultadoscães foram avaliados em cada ponto de tempo como não superiores quanto a eficácia de controle de pulgas emapresentando sinais clínicos de DAPP até o fim do estudo, cada marcação de tempo (Tabela 4) e quanto a eficáciaenquanto que no grupo Frontline™ (fipronil) apenas 55,6% do controle de carrapatos em cada marcação de tempo,(10 de 18) não tinham sinais clínicos de DAPP. exceto para semanas 8 e 12, cujo resultado foi de quase 100% para ambos os tratamentos (Tabela 5). A No geral, 8 eventos adversos relatados durante todo o eficácia do Bravecto™ (fluralaner) contra carrapatosperíodo de estudo de 12 semanas foram considerados manteve-se próxima de 100% durante todo o períodocomo possivelmente relacionados com o tratamento de estudo de 12 semanas. Esta é uma duração de açãoadministrado, 4 em cada grupo de tratamento, apesar da excepcional para uma única dose de acaricidaproporção de alocação de 1: 2. Havia 2 cães (0,5%) com administrada por via oral.vômitos/diarreia e 2 cães (0,5%) com perda de apetiteentre os 383 cães no grupo tratado com Bravecto™ Uma preocupação dos médicos veterinários na prática(fluralaner); todos estes cães recuperaram-se dos sinais clínica é quanto à segurança do paciente em novosclínicos e mantiveram-se no estudo. Nos 178 cães tratamentos. Considerando todo o período de estudo detratados com Frontline™ (fipronil), 3 cães (1,7%) 12 semanas, apenas 4 dos 383 (1,0%) cães tratados comdesenvolveram alopecia e crostas na área lombo-sacral Bravecto™ (fluralaner) no estudo apresentaram um eventodorsal e um cão (0,6%) desenvolveu prurido intenso. adverso, que foram eventos transitórios exclusivamenteTodos estes cães permaneceram no estudo; 3 gastrointestinais, incluindo vômitos e perda de apetite. Osrecuperaram-se e 1 apresentou sinais clínicos em curso na 178 cães tratados com Frontline™ (fipronil) tambémconclusão do estudo. tiveram 4 eventos adversos (2,2%) que foram principalmente dérmicos, o que seria de se esperar de umDiscussão tratamento tópico.Um único tratamento administrado por via oral de Taxas pobres de aderência, com protocolos deBravecto™ (fluralaner) na dose recomendada controlou tratamento mensal para as opções terapêuticas existentesefetivamente pulgas e carrapatos nos cães de proprietários são um fator em potencial para a redução de eficáciadurante 12 semanas sob infestação natural. O Bravecto™ ectoparasiticida observada do tratamento [2]. Bravecto™(fluralaner) é o primeiro ectoparasiticida administrado por (fluralaner) é eficaz ao longo de um intervalo de 12via oral para demonstrar este longo período de eficácia semanas em comparação com o tratamento padrãocontra pulgas e carraptos em cães após uma única dose. Um mensal. Não há receio com o uso de Bravecto™único tratamento de Bravecto™ (fluralaner) foi (fluralaner) que, portanto, deve oferecer uma maior taxasignificativamente não inferior a 3 tratamentos sequenciais de aderência em comparação com os tratamentos mensaisde Frontline™ (fipronil) para controlar pulgas e carrapatos recomendados.em cães, como demonstra o menor limite de confiança de97,5%> - 0,15 em todos os momentos (Tabela 6). Além Bravecto™ (fluralaner) demonstrou uma taxa dedisso, o tratamento de Bravecto™ (fluralaner) demonstrou ser recuperação bem alta de sinais clínicos de DAPP em cãessuperior ao Frontline™ (fipronil) no percentual de domicílios tratados, com 85,7% de resolução imediata de todos oslivres de pulgas no estudo, como demonstrado pelo menor sinais clínicos em comparação com as suas lesões de pele97,5% limite de confiança > 0 em todas as marcações de no início do estudo. Embora as pulgas devamtempo (Tabela 6). Portanto, esses resultados de eficácia são necessariamente se alimentar a fim de que sejam expostasconsistentes com os resultados in vitro previamente a Bravecto™ (fluralaner), o grau de eficácia no controlereportados de ligação aos receptores de membrana neuronal de pulgas levou à eliminação dos sinais clínicos da DAPPpara fluralaner e fipronil [5]. numa taxa maior do que a observada com tratamento tópico de Frontline™ (fipronil).Tabela 4. Eficácia do controle antipulgas Tabela 5. Eficácia do controle de carrapatos Bravecto™ (fluralaner) Frontline™ (fipronil) Bravecto™ (fluralaner) Frontline™ (fipronil)Semana 2 99,2% 94,1% Semana 2 99,9% 97,6%Semana 4 99,8% 93,0% Semana 4 99,9% 93,8%Semana 8 99,8% 96,0% Semana 8 99,7% 100%Semana 12 99,9% 97,3% Semana 12 100% 100%42 42

Rohdich et al. Parasites & Vectors 2014, 7:83http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/83Tabela 6. Porcentagem de residências livres de pulgas 2. Beck S, Schein E, Baldermann C, von Samson-Himmelstjerna G, Kohn B: Tick infestation and tick prophylaxis in dogs in the areaou carrapatos FrontlineT of Berlin/Brandenburg – results of a questionnaire study. Berl M Munch Tierarztl Wochenschr 2013, 126:69–76. Bravecto™ Valor P inferior 97,5% (fluralaner) C,I. aunilateral 3. Ozoe Y, Asahi M, Ozoe F, Nakahira K, Mita T: The antiparasitic (fipronil) isoxazoline A1443 is a potent blocker of insect ligand-gated chloride channels. Biochem Biophys Res Commun 2010, 391:744–Pulgas 749. Semana 2 89,57% 62,30% <0,0001 0,1498 4. European Commission, Community register of veterinary medicinal products, Product information Bravecto: Annex 1 Summary of Semana 4 94,87% 63,93% <0,0001 0,1916 product characteristics. Bruxelles; 2014. http://ec.europa.eu/health/documents/community-Semana 8 95,65% 70,49% <0,0001 0,1416 register/html/v158.htm. Semana 12 97,39% 81,97% <0,0001 0,0586 5. Gassel M, Wolf C, Noack S, Williams H, Ilg T: The novel isoxazoline ectoparasiticide fluralaner: Selective inhibition of arthropod γ-Carrapatos aminobutyric acid- and L-glutamate-gated chloride channels and insecticidal/acaricidal activity. Insect Biochem Mol Biol 2014, Semana 2 97,67% 89,47% 0,0006 −0,0575 45:111–124. Semana 4 97,67% 84,21% 0,0001 −0,0175 6. Marchiondo AA, Holdsworth PA, Green P, Blagburn BL, Jacobs DE: World Association for the Advancement of VeterinarySemana 8 97,67% 94,74% 0,0024 −0,0953 Parasitology (WAAVP) guidelines for evaluating the efficacy of parasiticides for the treatment, prevention and control of fleaSemana 12 100,0% 100,0% n/ab n/ab and tick infestation on dogs and cats. Vet Parasitol 2007, 145:332–344. a Resultados superiores a -0,15 necessário declarar não inferioridade significativa,Resultados maiores que 0 necessário declarar superioridade unilateral 7. Farrington CP, Manning G: Test statistics and sample sizesignificativa com α = 0,025. formulae for comparative binomial trials with null hypothesisb.Nenhum teste estatístico já que todas as residências estavam livres de of non-zero risk difference or non-unity relative risk. Stat Med carrapatos na semana 12 2009, 9:1447–1454.n/a: não aplicável doi:10.1186/1756-3305-7-83 Conclusões Cite este artigo como: Rohdich et al.: A randomized, blinded, Uma dose administrada por via oral única de Bravecto™ controlled and multi-centered field study comparing the efficacy and (fluralaner), administrada em uma pastilha para cães, é safety of Bravecto™ (fluralaner) against Frontline™ (fipronil) in flea- altamente eficaz durante 12 semanas contra pulgas e and tick-infested dogs. Parasites & Vectors 2014 7:83.carrapatos naturalmente adquiridos pelos cães emcondições de campo. Uma dose administrada por via oralúnica de Bravecto™ (fluralaner) é significativamente nãoinferior (carrapatos) e superior (pulgas) para três doses deFrontline™ (fipronil) tópico administradas durante omesmo período. Bravecto™ (fluralaner) é seguro e bemtolerado e a longa atividade de ação oferece umtratamento mais conveniente sobre os tratamentos decontrole mensais, com a vantagem potencial de adesão.Conflito de interessesTodos os autores são funcionários da MSD Saúde Animal.Contribuições dos autoresNR, EZ e RKAR são os autores do projeto de estudo e protocolo. Oestudo foi conduzido por NR e EZ completou os cálculos estatísticos.Todos os autores revisaram e aprovaram a versão final.AgradecimentosOs autores gostariam de agradecer aos muitos veterinários quetomaram o tempo de suas agendas lotadas para implementar esteestudo em suas rotinas.Declaração de conformidadeEste estudo foi realizado na Alemanha, França e Espanha, após aobtenção da autorização das autoridades reguladoras competentespara esses países. Antes do tratamento de qualquer animal, oconsentimento do proprietário foi obtido por escrito.Recebido: 18 dez 2013 Aceito: 24 de fevereiro de 2014Publicado em: 04 de março de 2014Referências 1. Coles TB, Dryden MW: Insecticide/acaricide resistance in fleas and ticks infesting dogs and cats. Parasit Vectors 2014, 7:8. 43 43

Coles and Dryden Parasites & Vectors 2014, 7:8http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/8REVISÃO Acesso abertoResistência de pulgas e carrapatos a inseticidas/acaricidas eminfestações de cães e gatosTad B Coles1* and Michael W Dryden2ResumoEsta revisão define a resistência a inseticidas/acaricidas e descreve a história, evolução, tipos, mecanismos e detecçãoda resistência que se aplica a produtos químicos comumente usados contra pulgas e carrapatos de cães e gatos eresume a resistência relatada até o momento. Nós introduzimos o conceito de refugia tal como se aplica à resistênciade pulgas e carrapatos: discute-se estratégias para minimizar o impacto e o inevitável início de resistência a classesmais novas de inseticidas. Nosso objetivo é fornecer as informações necessárias para o médico veterinário investigar eresponder às reclamações de seus clientes sobre possíveis falhas de eficácia e avaliar a relativa importância daresistência enquanto os médicos veterinários lutam para aliviar os sintomas de seus pacientes e satisfazer seus clientesquando se deparam com infestações de pulgas e carrapatos difíceis de serem resolvidas. Nós concluímos que a causada possível falha de eficácia do inseticida/acaricida se deve mais à deficiência do tratamento do que à resistência emsi.Palavras-chave: Pulga, Ctenocephalides felis, Carrapato, Rhipicephalus sanguineus, Cão, Gato, Inseticida, Acaricida,Resistência, Refugia, Refugium.Revisão Ctenocephalides felis (pulga do gato), C. canis (pulgaHistórico do cão), Echidnophaga gallinacea (pulgas de aves),Neste trabalho vamos revisar as informações atuais Pulex irritans (pulga do ser humano) e suarelativas à resistência de pulgas e carrapatos a inseticidas e intimamente relacionada P. simulans [2-4]. Aacaricidas, respectivamente, de interesse para médicos Ctenocephalides felis é, de longe, a pulga mais comumveterinários de cães e gatos. Os veterinários precisam infestando cães e gatos ao redor do mundo [2,4,5]. Emfornecer respostas aos proprietários de animais de um estudo de campo, todas as 972 amostras de pulgasestimação com expectativas insatisfeitas e há muitas razões obtidas de cães e gatos de 2001 a 2005, nos Estadospelas quais os clientes expressam essa insatisfação. Unidos, Reino Unido e Alemanha eram deInvestigar possíveis inconsistências relacionadas ao Ctenocephalides felis [6].tratamento com inseticidas/acaricidas de todos osmamíferos domésticos na residência e determinar se pets Cães e gatos comprovadamente servem devizinhos ou animais silvestres infestados por pulgas podem hospedeiros intermediários para uma variedade deestar servindo como fonte de reinfestação é imperativo e espécies de pulgas, adquirindo pulgas de animaisirá sempre apontar estratégias para melhorar a eficácia do silvestres e trazendo-as para casa para infestar outrostratamento e a satisfação do cliente [1]. Com frequência, os animais domésticos e pessoas [2], mas é maisclientes levantam a questão da resistência aos provável que cães e gatos sirvam como fonte originalinseticidas/acaricidas assim que veem evidências da de pulgas, as quais acabam sendo transmitidas apresença de pulgas e carrapatos em seus pets recentemente animais silvestres urbanos, que funcionam comotratados. A seguinte revisão geral da resistência a reservatórios hospedeiros, mantendo uma populaçãoinseticidas/acaricidas, focando em espécies de pulgas e de pulgas que reinfesta cães e gatos domésticos apóscarrapatos que infestam cães e gatos, ajudará os tratamento.veterinários a responder às preocupações de seus clientes. Os cães na América do Norte são mais comumente Das cerca de 2.500 espécies de pulgas descritas, pelo infestados com as seguintes espécies de carrapatos:menos 15 infestam cães e gatos ocasionalmente [2]. Amblyomma americanum (carrapato estrela), A.Entretanto, apenas algumas espécies de pulgas têm maculatum (carrapato da Costa do Golfo), Dermacentorimportância como carreadoras de doenças e pragas variabilis (carrapato do cão americano), D. andersoniincômodas para cães, gatos e seus proprietários: (carrapato da madeira das Montanhas Rochosas), D. occidentalis (carrapato da Costa do Pacífico), Ixodes*Contato: [email protected] pacificus (carrapato de pernas pretas do oeste), I.1Medical Writing and Veterinary Consulting, Overland Park, KS 66212, USA scapularis (carrapato de pernas pretas), Otobius megniniA informação completa sobre o autor está disponível no final do artigo. (carrapato espinhoso de orelha) e Rhipicephalus sanguineus (carrapato marrom do cão) [5,7]. © 2014 Wengenmayer et al.; licenciado por BioMed Central Ltd. Este é um artigo de acesso livre distribuíd sob os termos da Licença Atribuída a Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0), que permite o uso, distribuição e reprodução irrestrita em qualquer meio, desde que o trabalho original seja devidamente creditado. A dispensa da dedicatória ao domínio público da Creative Commons (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) aplica-se aos dados disponibilizados neste artigo, salvo indicação em contrário.44 44

Coles and Dryden Parasites & Vectors 2014, 7:8http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/8 Os gatos, que não são tão comumente infestados forma que os indivíduos resistentes sobrevivam a umaquanto os cães, são parasitados por: A. americanum, D. concentração de composto(s) que normalmente seria letalvariabilis e I.scapularis [7]. à espécie”. Até essa definição mais recente é problemática porque ela inclui o termo “tolerância”. Para esclarecimento, pulgas e carrapatos sãoartrópodes mas, desses dois, apenas as pulgas são insetos A literatura científica está cheia de diferentese, portanto, usamos inseticidas para matá-las. Carrapatos definições de “resistência”, que deveriam sernão são insetos, são aracnídeos (classe arachnida, como consideradas assim que relatos históricos de “resistência”ácaros e aranhas) e, portanto, nós usamos acaricidas para são revisados. Após Melander ter apresentado o tópico damatá-los. Diferentes compostos têm graus variáveis de resistência, as pesquisas mais frequentemente relatadaspropriedades inseticidas e/ou acaricidas. sobre resistência a inseticidas abrangeram pestes de lavouras e insetos vetores de doenças humanas,Histórico e definição de resistência especialmente mosquitos. Os mosquitos começaram aO primeiro relato de resistência a inseticida/acaricida não mostrar resistência ao DDT mais ou menos ao mesmofoi em pulgas ou carrapatos. Melander levantou o tópico tempo em que se notou a resistência das moscasda resistência a inseticidas há um século, em 1914, domésticas ao DDT na Itália, em 1946 [14]. A resistênciaquando ele quis saber se insetos infestantes de árvores das pulgas foi percebida primeiramente em 1949 emfrutíferas poderiam tornar-se resistentes a inseticidas em Pulex irritans peruanas que eram resistentes aospray [8]. A resposta dele para a questão “Os insetos diclodifeniltricloetano (DDT) [15]. A resistência dapodem ser resistentes aos sprays?” foi sua descoberta de Ctenocephalides felis ao DDT foi primeiro relatada emque certas populações de cochonilhas de San Jose em 1952 seguida por relatos de resistência aocertos locais ainda estavam vivas mesmo depois de serem hexaclorobenzeno (BHC) e dieldrim em 1956 [16]. Apulverizadas com concentrações de enxofre-cal que resistência de carrapatos foi notada primeiramente emmataram todas as cochonilhas em outros locais, um relato 1954 ao dieldrim em Rhipicephalus sanguineus [15]. Aamplamente referido como uma das primeiras evidências suspeita de resistência do Dermacentor variabilis aodocumentais de resistência a inseticidas. Mas, enquanto DDT, BHC e dieldrim foi relatada em 1959 [16]. Oisto é frequentemente citado como evidência de número de espécies de artrópodes com suspeita deresistência, o que ele realmente provou foi que diferentes resistência a inseticida/acaricida aumentou para 37 empopulações de cochonilhas separadas por localidades 1955, como “prova quantitativa e inquestionável” datinham diferentes susceptibilidades ou tolerâncias a este resistência de 18 dessas espécies [15].inseticida. Se as diferenças eram ou não devidas àresistência genética adquirida, não se sabe. Para este trabalho, nossa definição de resistência a inseticida/acaricida é a seleção de um traço (ou traços) Enquanto resistência e tolerância são frequentemente hereditário(s) específico(s) em uma população deusadas de maneira indistinta, elas não são a mesma coisa. artrópodes, devido ao contato dessa população com umAo contrário da resistência, a tolerância é muito mais produto químico que resulta em um aumento significativouma tendência natural do que um resultado de pressão de na porcentagem dessa população que irá sobreviver aseleção [9]. Certos indivíduos são mais tolerantes a uma uma dose padrão desse produto (ou a um produto similardose de um pesticida específico do que outros. Algumas em caso de resistência cruzada).vezes é difícil diferenciar a resistência verdadeira davariação natural de susceptibilidade a pesticidas que Evolução da resistênciaexiste como uma curva normal em toda população de Indivíduos com traços genéticos que permitam apragas [10] A tolerância também é usada para descrever sobrevivência à exposição a um inseticida/acaricidadiferenças naturais dentre diferentes espécies ou estágios passarão os genes à próxima geração, aumentandointermediários de vida de organismos [11]. Por exemplo, potencialmente a porcentagem da população que podecarrapatos são naturalmente mais tolerantes a sobreviver à subsequente exposição ao produtoimidacloprid do que pulgas, e Trichuris vulpis é mais químico [1]. Dentro da definição mais restrita detolerante ao palmoato de pirantel do que o Ancylostoma resistência a inseticidas/acaricidas, as inerentescaninum. diferenças de susceptibilidade baseadas em uma curva normal em uma população “normal” deveriam ser O que constitui prova de resistência e como a lembradas [17], porque a susceptibilidade das novasresistência é definida? A definição de resistência mudou populações é comparada com a da população antiga oucom o passar do tempo. A Organização Mundial da “normal” quando se procura por um aumentoSaúde (OMS) tem servido como coordenadora global significativo na capacidade de sobrevivência. Há trêspara informação sobre resistência de vetores e sobre a condições necessárias para que a evolução dapadronização de medidas de resistência a pesticidas resistência ocorra:através do fornecimento de metodologia e kits de testespara medidas de resistência. Em 1957, a OMS [12] 1. Os indivíduos da população devem ter diferenciaçãodefiniu resistência como “o desenvolvimento de uma genéticahabilidade para tolerar venenos que seriam letais para amaioria dos indivíduos de uma população normal da 2. Diferenças genéticas devem produzir uma diferençamesma espécie.” Mais tarde, em 1992, a OMS [13] fenotípicadefiniu resistência em artrópodes como “umacaracterística herdada que comunica uma tolerância 3. A diferença fenotípica deve aumentar a capacidadeaumentada a um pesticida ou a um grupo de pesticidas de de sobrevivência, transferindo a resistência à próxima geração [17] 45 45

Coles and Dryden Parasites & Vectors 2014, 7:8http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/8 Genes resistentes desenvolvem-se através de A sensibilidade de local-alvo refere-se à indução deprocessos naturais como mutação e recombinação. O resistência via alteração de enzimas e receptores neuronaisuso contínuo de parasiticidas que matam artrópodes de local-alvo, de forma que o inseticida/acaricida não maisdesprovidos de genes de resistência seleciona os se ligue de modo eficaz nesses locais e, consequentemente,indivíduos cujos genes são resistentes. Portanto, a nem a pulga nem o carrapato são afetados. Como exemplo,resistência a inseticidas/acaricidas é essencialmente inseticidas organofosforados ou carbamatos inibem auma evolução em tempo acelerado. Os parasiticidas acetilcolinesterase (AChE). A população de artrópodesnão causam resistência por si próprios; eles torna-se resistente a esses componentes quando algunscontribuem para o processo permitindo a indivíduos da população desenvolvem uma enzima AChEsobrevivência de indivíduos resistentes [6]. Melander modificada estruturalmente, permitindo sobrevivência àqueria saber se a diferença observada na exposição a inseticidas organofosforados e carbamatos quesusceptibilidade ao inseticida entre as populações de tenham capacidade de eliminar os indivíduos susceptíveis nacochonilhas seria o resultado da ambientação ou da população.imunidade, após serem expostas a pequenasquantidades de inseticidas em um período de tempo, A resistência metabólica depende de: a) alterações deou se elas teriam desenvolvido uma resistência sistemas de enzimas que os artrópodes usam para sehereditária real. Se Melander conseguisse demonstrar desintoxicar de materiais estranhos ou b) impedir que ouma diferença hereditária real entre as populações inseticida/acaricida atinja seu local de ação. Isto ocorrecomo a a responsável pela mudança na com esterases, oxidases, oxigenases, hidrolases esusceptibilidade ou se ele conseguisse provar a glutationa-s tranferases [17,18].mudança nas diferenças de susceptibilidade de umapopulação de insetos ao longo do tempo, então ele Os dois últimos tipos de resistênciasteria documentado a resistência como aqui definida. (comportamental e cuticular) não são tão comuns quanto as duas primeiras e são considerados menosTipos e mecanismos de resistência importantes. Insetos resistentes ao comportamentoEm 2012, a OMS expandiu sua definição de resistência a possuem comportamentos que reduzem o contato com oinseticidas incluindo 3 tipos de resistência [18]. Eles inseticida, como a tendência aumentada de se moverapresentaram esses tipos explicando que a resistência se para longe da área de superfície tratada. É geralmentereferia a um fenômeno evolucionário pelo qual um inseto difícil avaliar se a resistência comportamental é genéticanão era morto pela dose padrão de inseticida. Esses são ou adaptativa [17,18]. A penetração cuticular reduzidaos três tipos de resistência, ou maneiras de ver a retarda a absorção de um inseticida. Isto não éresistência, que a OMS identificou: tipicamente muito efetivo a não ser que venha combinado com outros mecanismos de resistência [17}.• Genotipagem molecular da resistência - O estudo da resistência a inseticidas/acaricidas ocorre identificação dos genes subjacentes que conferem o tipicamente na seguinte sequência: traço de resistência herdada, que fornece evidência do processo evolutivo. 1. Resistência detectada em uma população 2. Amostras de artrópodes coletados e colonizados em• Resistência fenotípica - mensuração de susceptibilidade quando submetido à dose padrão, laboratório remetendo à sua definição de resistência de 1957 3. A colônia é submetida à pressão de seleção ao como “desenvolvimento de uma habilidade, em uma cepa de insetos, para tolerar doses de venenos inseticida/acaricida para aumentar a frequência de que seriam letais para a maioria dos indivíduos em indivíduos resistentes uma população normal da mesma espécie.” 4. Caracterização do controle genético da resistência 5. Caracterização do(s) mecanismo(s) de resistência [17]• Resistência levando a falha no controle - referindo- se a uma falha dos inseticidas para controlar a Problemas relacionados à detecção ou relatos de transmissão de doença de um inseto vetor; a resistência em contextos clínicos preocupação da OMS era principalmente com Como a resistência é detectada? Embora possa parecer que a relação à malária. Essa “falha no controle” poderia resistência a pulgas e carrapatos seja evidente aos ser considerada como uma falha no controle da veterinários devido ao aumento de reclamações dos dermatite causada por pulgas ou falha no controle proprietários quanto à contínua detecção de pulgas e de várias doenças transmitidas por pulgas e carrapatos em face ao tratamento ou pela evidência de carrapatos. doenças transmitidas por pulgas e carrapatos, este não é realmente o caso. Às vezes pode ser difícil para os Além disso, quatro mecanismos de resistência foram veterinários, senão impossível, diferenciar entre a resistênciaidentificados: [17,18} dos parasitas e outras causas de ineficácia devido à multiplicidade de variáveis ambientais, de hospedeiros e• Sensibilidade do local-alvo clientes. Primeiramente, inconsistências na taxa de aderência• Metabólica dos proprietários devem ser consideradas [19]. Depois, com• Comportamental pulgas particularmente: há quanto tempo o tratamento com• Cuticular ou de penetração reduzida inseticidas está sendo feito? Isto é importante, dados os dois ou três meses necessários à emergência de pulgas após o início do tratamento tópico e sistêmico [1]. Os ovos de pulgas depositados nos locais antes do tratamento46 46

Coles and Dryden Parasites & Vectors 2014, 7:8http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/8continuarão a se desenvolver e novas pulgas emergentes vão Kits de testes da OMS têm sido usados há anos tanto paracontinuar a povoar a casa por pelo menos mais dois meses detectar quanto para monitorar a susceptilidade de pulgaspós tratamento, independentemente do tipo de tratamento do e carrapatos [13,21]. O método de papel de filtro da OMSanimal [1]. Dependendo do número de ovos e da taxa de e suas várias modificações utilizadas para o rastreio desobrevivência das larvas, o problema pode até piorar antes susceptibilidade de pulgas a vários inseticidas é discutidade melhorar [1]. Além disso, flutuações sazonais e anuais por Moysés [10]. Um bioensaio de aplicação tópica temnas populações de pulgas e carrapatos causadas por sido utilizado para comparar a atividade inseticida contramudanças ambientais ou por um afluxo de animais silvestres pulgas [22]. Além disso, um bioensaio com larvas deservindo como hospedeiros reservatórios, podem influenciar pulgas foi desenvolvido para monitorar a susceptibilidadedramaticamente a pressão de infestação [5,6] e a aparente ao imidacloprid [23]. No entanto, ao mesmo tempo emresposta ao tratamento. Finalmente, variações naturais nas que este ensaio tem sido utilizado para avaliar dezenas desusceptibilidades de diferentes populações de pulgas e isolados, a capacidade de verificar a susceptibilidade dascarrapatos podem certamente impactar os programas de larvas para prever a subsequente susceptibilidade oucontrole. Mesmo que os veterinários possam suspeitar de resistência de pulgas adultas não foi estabelecido.resistência ou até mesmo ter encontrado resistênciaverdadeira, dados todos esses fatores em potencial afetando Para carrapatos, além dos kits de teste da OMS, ao controle, relatos de casos de falhas individuais não podem Organização para a Alimentação e Agricultura (Food andser entendidos como resistência documentável. Agriculture Organization, FAO), o Teste de Pacote de Larvas (LPT) é um ensaio biológico padrão utilizado para O monitoramento da incidência ou prevalência de medir a susceptibilidade do carrapato aos acaricidas [24].doenças causadas ou transmitidas por pulgas e transmitidas O FAO-LPT envolve a colocação de larvas de carrapatopor carrapatos fornecem uma reflexão acurada da resistência em um filtro de papel tratado com uma quantidadea inseticidas/acaricidas? As infestações de pulgas em conhecida de acaricida [24-26]. Muitos outros sistemasanimais de companhia estão associadas a dermatite alérgica de bioensaios foram criados, incluindo testes de imersãoa picada de pulgas (DAPP), anemia por deficiência de ferro de larvas e adultos [26-28].e vermes chatos Dipilidium caninum em cães e gatos; pestebubônica (causada por Yersinia pestis) em gatos; Um microensaio de imersão larval de carrapatoshemobartonelose (causada por Bartonella spp.) em cães, (LIM) foi desenvolvido e foram estabelecidas referênciasgatos e humanos; e tifo murino (causado por Rickettsiatyphi de potência da droga para organofosforado, piretroide,ou R. felis) em humanos [2,4]. Doenças transmitidas por carbamato, formamidine, lactonas macrocíclicas, ecarrapatos incluem Anaplasma platys, A. phagocytophilum, acaricidas pirazólicos para os seguintes carrapatos deBorrelia burgdorferi, Babesia canis, B. gibsoni, B. microti, importância para cães e gatos: Amblyomma americanumBorrelia lonestari, Cytauxzoon felis, Ehrlichia canis, E. (carrapato estrela americano), A. maculatum (carrapato dachaffeensis, E. ewingii, Francisella tularensis, Hepatozoon costa do golfo), Dermacentor variabilis (carrapato do cãoamericanum, Rickettsia rickettsii, e paralisia do carrapato americano), e Rhipicephalus sanguineus (carrapato[7]. A relação entre a resistência de mosquitos a inseticidas e marrom do cão) [27]. Além disso, um TTL tem sidoas doenças transmitidas por vetores foi estudada mais desenvolvido, envolvendo a colocação de ovos carrapatoextensivamente do que as de pulgas e carrapatos. Por mais em placas multipoços para permitir a avaliação de váriosque faça sentido que o aumento da resistência de vetores (a produtos químicos [29,30].inseticidas) possa levar à diminuição do controle de doençastransmitidas por vetores, este não é necessariamente o caso. Outro método para avaliar diferenças deAlguns mosquitos resistentes a inseticidas têm capacidade suscetibilidade (e potencial resistência) é administrarfísica reduzida, uma vida útil mais curta, ou carregam compostos de teste diretamente para animais infestadosmenores quantidades de filárias, o que pode diminuir a com diferentes populações de pulgas ou carrapatos eincidência de doenças transmitidas por vetores enquanto a comparar as contagens subsequentes de pulgas oupopulação de mosquitos resistentes a inseticidas aumenta carrapatos, de ovos de pulgas e viabilidade de ovos de[20]. Por outro lado, aumentos na população de carrapatos pulgas em controles negativos e grupos tratados denão relacionados à resistência podem ser associados com o animais [31]. Essas avaliações podem demonstraraumento da incidência de doenças transmitidas por diferenças de suscetibilidade entre as populações ecarrapatos [4]. O ponto principal é que o efeito das fornecer dados que são mais diretamente aplicáveis aospopulações de pulgas e carrapatos inseticida/acaricida- médicos veterinários; no entanto, estes estudos são carosresistentes no risco de doenças transmitidas por pulgas e e demorados e não têm sido comumente utilizados.carrapatos é desconhecido. Assim, o monitoramento para oaumento da incidência ou prevalência de doenças causadas Se as mutações genéticas estão associadas aou transmitidas por pulgas e doenças transmitidas por resistência inseticida ou acaricida, então o teste paracarrapatos pode não ser um método confiável para a frequência de mutação genética em uma população dedetecção de resistência em artrópodes. pulgas ou carrapatos pode medir indiretamente o nível de resistência nessa população. Ensaios de Reação emDetecção de resistência em laboratório Cadeia da Polimerase (PCR) foram desenvolvidos paraEm contraste, pesquisar as populações de pulgas e testar individualmente as pulgas quanto à presença decarrapatos e o uso de bioensaios para comparar a mutações de genes associados com resistência asusceptilidade entre as populações é uma abordagem piretroides, a mutação comum à resistência de quedamuito mais confiável para se determinar a resistência. (knockdown, kdr) e mutações super-kdr [32]. O monitoramento de busca por uma nova mutação emergente é difícil. Como parte de um programa de monitoramento proativo de populações de pulgas para 47 47

Coles and Dryden Parasites & Vectors 2014, 7:8http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/8redução da susceptibilidade ao imidacloprid antes do Relatos de resistênciaestabelecimento de resistência, sete genes codificantes parareceptores nicotínicos de acetilcolina em pulgas de gatos Resistência a Ctenocephalides felis foi relatada para:foram identificados (o receptor pelo qual o imidacloprid carbamatos, organofosforados, piretroides, piretrinas,provoca seu efeito inseticida) [33]. Monitorar pulgas antes organoclorados e fipronil - mais categorias do queque desenvolvam resistência é algo prudente, pois o espécies de pulga [13,37,41,42]. Uma cepa de pulgas daimidacloprid é comumente usado contra outras espécies de Flórida teve RRs de 6,8 para a ciflutrina, 5,2 ainsetos além de pulgas, como, por exemplo, pulgões e cipermetrina, e 4,8 para o fluvalinato, em comparaçãomoscas brancas, e também porque a cigarrinha marrom com uma cepa de pulgas da Califórnia [43]. Em relação a(Nilaparvata lugens) tem mostrado resistência local de produtos químicos atualmente utilizados nos Estadosdestino para imidacloprid [33]. Esta base de conhecimento Unidos contra pulgas, foi encontrada resistência degenético irá acelerar o desenvolvimento de ensaios de PCR Ctenocephalides felis para permetrina a um RR de 12para detectar a resistência emergente em populações de [10], clorpirifós em um RR de 10 [44], e propoxur em umpulgas se desenvolverem uma nova mutação para resistência RR de 4,4 [44,45]. Resistência de Ctenocephalides felisao imidacloprid. ao fipronil foi relatada em uma cepa coletada a campo a partir de uma denúncia, que teve um RR de 26 para o Um ensaio de PCR foi desenvolvido para testar pulgas DL50 (Dose Letal - que matou 50% da população tratada)individualmente para a \"resistência a dieldrina\" ou gene Rdl e um RR de 25 para o LD95 quando comparado com uma[34,35]. O gene Rdl está associado à resistência cruzada a cepa suscetível de fipronil selecionada por cientistasfipronil em outras espécies de insetos, mas que ainda não concorrentes da indústria [37]. Nenhuma resistênciatenha sido comprovada a associação com a resistência de cruzada a nitenpiram foi encontrada na cepa resistente aopulgas aos inseticidas atualmente utilizados [36]. No fipronil [37], o que não é inesperado, porque os doisentanto, os resultados de dois estudos que identificaram compostos têm diferentes modos de ação.cepas de pulgas com susceptibilidade reduzida ao fipronilpode sugerir que algumas cepas de pulgas podem ser Enquanto os RRs são muitas vezes utilizados emresistentes ao fipronil (esse assunto será discutido com mais ensaios de laboratório para avaliar as diferenças deprofundidade mais para a frente) [31,37]. sensibilidade entre as linhagens de insetos, existem muito poucos dados para verificar se essas RRs realmente são Uma questão muitas vezes levantada quando se discute a significativas para o médico veterinário em sua tentativaresistência é quanto tempo se deve esperar para se reintroduzir para eliminar uma infestação de pulgas. Um estudoum inseticida após a resistência ter causado problemas de analisou os RRs e a correspondente eficácia de fipronilcontrole. Não há uma resposta fácil a essa pergunta. Por contra pulgas em gatos [31]. Esse estudo comparou aexemplo, a dieldrina não tem sido utilizada como um pesticida susceptibilidade ao fipronil de cepas de pulgas de doisdesde os anos 1980. Seria de se esperar que a falta de uso da laboratórios diferentes colonizadas antes da introduçãodieldrina e a correspondente redução na pressão seletiva comercial do fipronil com uma cepa de campo da Flórida ediminuísse a prevalência destes genes de resistência; no descobriu que, enquanto fipronil foi ≥ 99,5% eficaz contraentanto, o gene Rdl ainda persiste em genomas de insetos adultos de todas as três cepas no primeiro dia de[36]. A persistência de resistência genética varia com tratamento, a atividade residual de fipronil contra a cepa dediferentes produtos químicos. O gene Rdl persiste em muitas campo foi significativamente reduzida. O RR da cepa deespécies de insetos (mosquitos, moscas), apesar do uso campo em comparação com a cepa de laboratório maisdescontinuado deste pesticida [38]. Por outro lado, a susceptível foi de apenas de 2,1, mas esse baixo RRresistência a insetos ao DDT e organofosforados mostrou reduziu a eficácia residual de 30 dias do fipronil de 100%reversão rápida após a suspensão do uso e diminuição da para 77,3% [31]. Isto ilustra que uma grande alteração napressão de seleção [38]. A diminuição da resistência a eficácia residual pode estar associada com uma mudançaCtenocephalides felis para organofosforados (clorpirifós e relativamente pequena no RR. Além disso, quando um RRmalathion) foi observada um ano depois que a pressão de é relatado entre duas populações, não significaseleção a organofosforados foi removida [39]. necessariamente que uma população é resistente (conforme definido neste artigo); ele pode simplesmente significar Outra forma de monitorar o surgimento de resistência é que o ensaio detectou diferenças em susceptibilidade entreverificar se há modificação hereditária em sistemas as populações de ocorrência natural.enzimáticos de artrópodes usados para desintoxicarmateriais estranhos ou impedir que um produto químico El-Gazzar et al. suspeitaram de resistência quandoatinja o seu local de ação. Um exemplo deste mecanismo de descobriram que uma cepa de pulga da Flórida foi maisdesintoxicação é que o aumento da atividade de esterase em tolerante do que uma da Califórnia para nove inseticidasinsetos anula os efeitos do piretroide e outras classes de (bendiocarb, carbaril, propoxur, clorpirifós, malathion,inseticidas. O desenvolvimento de um ensaio para pesquisar clorfenvinfós, diazinon, isofenfós e propetamfós) [44].pulgas com esterase elevada [40] melhorou a capacidade de Após manter esta cepa em laboratório por um ano,tomar decisões quanto ao manejo da resistência, porque seu durante o qual os gatos usados na produção de pulgasuso pode fornecer uma indicação preliminar de resistência foram ocasionalmente tratados com 5% de pó carbarilpela estimação da frequência de alelos de resistência em para reduzir a irritação e perda de pelo, os pesquisadoresuma população. Este processo pode fornecer um sinal de descobriram nesta colônia de pulgas aumento daaviso prévio de resistência, melhor do que outros métodos, resistência por carbamatos (bendiocarb, carbaril, etais como a determinação de razão de resistência (RR). O propoxur), diminuição da resistência porRR é a relação entre a dose letal em cepa testada e a cepa organofosforados (clorpirifós e malathion), e resistênciasusceptível de referência. inalterada em direção clorfenvinfós, diazinon, isofenfós e48 48

Coles and Dryden Parasites & Vectors 2014, 7:8http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/8propetamfós [39]. Eles suspeitavam de que a exposição diminuição da eficácia pode ser tolerância casoda colônia ao carbaril induziu aumento da resistência aos existam diferenças de susceptibilidade entre duascarbamatos [39]. espécies diferentes, ou a causa pode ser uma variação presente na curva normal se há diferenças na Um ensaio de laboratório capaz de monitorar a susceptibilidade entre duas populações da mesmasusceptibilidade de Ctenocephalides felis a imidacloprid espécie. A susceptibilidade reduzida da cepa KS1 sem[23,44,46] foi feito para encontrar populações com exposição prévia ao parasiticida ilustra que a variaçãosensibilidade diminuída, as quais foram, em seguida, genética dentro de uma espécie certamente poderianovamente testadas a uma dose diagnóstica de 3 ppm contribuir para o desenvolvimento de uma eventualpara avaliar resistência [6,47]. Cepas de pulgas com resistência.emergência dos adultos >5% após a exposição aotratamento com imidacloprid (6 dessas cepas foram Pesquisa na base de dados Arthropod Pesticidereportadas em 2006 e 22 em 2011) foram investigadas; Resistance (APRD) [57], acessível emNo entanto, nenhum destes isolados foi classificado pelo http://www.pesticideresistance.com/, que usa umabioensaio como resistente a imidacloprid [6,47]. qualificação de RR ≥10 para ser considerada resistente revelou que para pulgas de interesse para os veterinários A cepa KS1 de Ctenocephalides felis, que foi coletada de pequenos animais houve 12 relatos de resistência ade cães e gatos em um abrigo do Kansas em 1990 e desde inseticidas para Ctenocephalides canis, 28 relatos deentão tem sido mantida em laboratório, documentou resistência para C. felis, e 13 para Pulex irritans.resistência ou susceptibilidade reduzida natural paracarbaril, clorpirifós, fenthion, fipronil, imidacloprid, Nenhum desses relatórios referenciados pela APRDpermetrina, piretrinas e espinosad [23,31,32,48-52]. Com envolvem resistência a produtos químicos atualmentebase em bioensaios e análises genéticas da causa da conhecidos para controle de pulgas em cães e gatos nosqueda da eficácia piretroides e organofosforados com esta Estados Unidos. A resistência Ctenocephalides canis foicepa, é provável que a resistência seja verdadeira encontrada para BHC/ciclodienos, DDT e HCH-gama.[32,48,49]. No entanto, inseticidas como o fipronil, Resistência a Ctenocephalides felis foi encontrado paraimidacloprid e spinosad, que também apresentaram bendiocarb, BHC/ciclodienos, carbaril, clordano,redução da atividade contra a cepa KS1 [23,31,50-52] ciflutrina, cipermetrina, DDT, dieldrin, fenvalerato,foram comercialmente introduzidas no mercado dos fluvalinato, HCH-gama, malathion, e metoxicloro.Estados Unidos 6 anos (fipronil e imidacloprid) ou 17 Resistência a Pulex irritans foi encontrada paraanos (spinosad) depois que a cepa KS1 foi colonizada. A BHC/ciclodienos e DDT.atividade residual de 28-30 dias de fipronil, imidaclopride spinosad variam entre 95% a 100% com outras cepas de A APRD também contém relatos de resistência apulgas, mas é marcadamente reduzida quando testada carrapatos de interesse para os veterinários que tratam decontra a cepa de KS1 [31,50,53,54]. Em contraste, outros cães e gatos. Houve um relato de resistência a acaricidasinseticidas de ação residual introduzidos recentemente e para Amblyomma americanum, dois relatos de resistênciaatualmente usados (indoxacarb, dinotefuran e para Dermacentor variabilis e 9 para Rhipicephalusselamectina) têm excelente atividade residual contra sanguineus.pulgas de cepa KS1 [50-52,55]. Para o Amblyomma americanum foi encontrada A cepa de pulga KS1 foi isolada sem exposição aos resistência para BHC/ciclodienos. Para o Dermacentorinseticidas mais recentes e sem introdução de pulgas de variabilis foi encontrada resistência parafora da colônia. Poderia a cepa KS1 ter desenvolvido BHC/ciclodienos e DDT. Para o Rhipicephalusresistência ao fipronil, imidacloprid e spinosad? Será que sanguineus, resistência encontrada para o amitraz,a KS1 tem uma redução de susceptibilidade inata? Será BHC/ciclodienos e organofosforados. A resistência aque a falta de eficácia devida à seleção prévia da KS1 acaricidas em carrapatos que infestam cães e gatos nãoestá associada com uma substância química diferente que foi investigada de forma tão extensiva como a detransmitiu uma resistência cruzada a esses produtos carrapatos de bovinos, especialmente Rhipicephalusquímicos? (Boophilus) microplus, que tem sido intensamente estudado, tanto devido à sua importância econômica para De acordo com Reinemeyer e Nielsen [56], os a indústria e porque a espécie é resistente a tantoscolegas parasitologistas gostam de dizer que \"em compostos [58]. Para fornecer alguma perspectiva, aalgum lugar no mundo existem vermes resistentes a APRD contém 81 relatos de resistência de Rhipicephalusuma classe de drogas que não foi descoberta ainda\". microplus aos seguintes produtos químicos: clorpirifós,Mas são esses parasitas (verdadeiramente resistentes cipermetrina, deltametrina, fipronil, flumetrina, ena completa acepção do termo) tolerantes ou eles ivermectina [57].simplesmente têm uma suscetibilidade naturalmentereduzida? Se a população de parasitas ainda não foi Com relação os carrapatos encontrados em cães eexposta ao parasiticida (ou a um parasiticida gatos, uma cepa de Rhipicephalus sanguineus recolhidarelacionado) e não evoluiu (através da seleção) para no Panamá foi comparada com cepas sensíveis de outrassobreviver à exposição, então essa população não pode áreas e foi classificada como altamente resistente aser classificada como resistente. Mesmo que a droga permetrina e moderadamente resistente ao amitraz, enão seja letal para a população e mesmo que uma suscetível ao fipronil [25,59]. Relatórios sobre outraspercentagem maior que a esperada dessa população cepas de Rhipicephalus sanguineus sugerem que asobreviva à exposição por esse parasiticida, essa resistência à deltametrina pode ocorrer, o que indica quepopulação não é resistente, por definição. A causa da a resistência aos acaricidas piretroides pode ser uma preocupação com este carrapato [59]. No entanto, 49 49

Coles and Dryden Parasites & Vectors 2014, 7:8http://www.parasitesandvectors.com/content/7/1/8estudos sugerem que a resistência varia entre as durante dois períodos de muda (larvas/ninfa ediferentes populações de Rhipicephalus sanguineus ninfa/adulto) [61]. Este carrapato infesta principalmente[59]. Estudos sinérgicos indicam que esterases podem bovinos. Estas características do ciclo de vidaestar envolvidas na resistência deste carrapato aos proporcionam muito pouco refugia, o que tornou possívelacaricidas piretroides [25]. a erradicação nos Estados Unidos. Os únicos carrapatos não expostos ao tratamento foram os de bovinos nãoO conceito de refugia aplicado à resistência a tratados. O programa de erradicação era e é exigido pelopulgas e carrapatos governo federal, de modo que essencialmente todos osO desenvolvimento de resistência é influenciado por bovinos infestados por carrapatos nos Estados Unidosmuitos fatores. O fator principal é a pressão de seleção foram tratados. A falta de refugia poderia ser umaevolutiva que um produto químico coloca em cima de explicação parcial para a resistência onipresente vistauma população de artrópodes. A porção da população de nesta espécie de carrapato.artrópodes que é exposta, em relação ao químico,influencia o resultado desta pressão. Se toda a população Considere os carrapatos Rhipicephalus sanguineus eé exposta, então a pressão seletiva é aumentada em Amblyomma spp. Eles são carrapatos de três hospedeiroscomparação com uma situação onde apenas uma pequena [61]. Portanto, cada etapa (larvas, ninfas, adultos) deveparte da população é exposta. \"Refugium\" é o termo encontrar um novo hospedeiro após uma muda nousado quando parasitologistas ou entomologistas ambiente [61]. O Rhipicephalus sanguineus prefere umreferem-se à porção da população da praga que não está hospedeiro canino para cada fase da vida [61], queexposta à substância química. O termo é comumente fornece refugia limitada para o carrapato marrom do cão,usado na medicina veterinária quando se discute a mas ainda assim maior do que a refugia de Rhipicephalusresistência de helmintos dos cavalos e ruminantes mas, microplus. Isso ocorre porque as larvas e ninfaspara o conhecimento dos autores, não foi usada em alimentadas de Rhipicephalus sanguineus realizam adiscussões de resistência de pulgas e carrapatos muda no local; não estão, portanto, sob a pressão deparasitando cães e gatos. Refugia (plural de refugium) seleção por acaricidas tópicos e, uma vez que cada mudaproporciona um reservatório de genes sensíveis aos é concluída, podem infestar um outro indivíduo diferente.pesticidas porque não há pressão seletiva sobre os Larvas e ninfas de Amblyomma spp. se alimentam de umaparasitas não expostos ao(s) produto(s) químico(s). A grande variedade de espécies, com carrapatosgestão de refugia por rotação de pastagem e encontrados em numerosos ruminantes, outros animaisadministração estratégica de anti-helmínticos, tratando-se selvagens e domésticos e seres humanos [61],apenas os animais mais fortemente parasitados, tem sido proporcionando assim o aumento substancial de refugiautilizado em cavalos e ruminantes para retardar a em comparação com o carrapato marrom do cão. Larvas eprogressão da resistência de helmintos. ninfas de Amblyomma maculatum são encontradas em uma grande variedade de aves, coelhos, ratos, esquilos e A situação com a resistência de pulgas e carrapatos de ratos. Amblyomma maculatum adultos foram encontradoscães e gatos é diferente, porque a gestão de refugium não em cães domésticos, gatos, cavalos, gado, porcos,foi estudada ou usada de forma estratégica nessa área. humanos e uma grande variedade de ruminantes (veados,Mas a melhor compreensão de refugia pode ajudar a cabras) e carnívoros (urso, bobcat, pantera, gambá,explicar as diferenças de resistência que existem e guaxinim, raposa, coiote) [62]. Este ciclo de vida fornecepodemos prever quais espécies serão mais propensas a vasta refugia para Amblyomma spp., e outros carrapatosdesenvolver resistência no futuro. Diferenças em refugia de 3 hospedeiros tais como Dermacentor spp. e Ixodesocorrem em diversos artrópodes parasitas devido a spp., e, por conseguinte, muito menos pressão de seleçãodiferenças no seu ciclo de vida e biologia. para o desenvolvimento de resistência para estas espécies em comparação com o carrapato marrom do cão. Considere a pulga do gato. Ovos, larvas, pupas e Portanto, em qualquer situação de eficácia questionável, aadultos pré-emergidos de Ctenocephalides felis vivem no identificação das espécies de carrapatos é útil, poissubstrato em torno de seu hospedeiro. Enquanto o enquanto a deficiência de tratamento é uma causa emhospedeiro pode ser tratado com insecticida, áreas do potencial, a suspeita de resistência do carrapato marromambiente frequentadas por hospedeiros alternativos que do cão tem mais credibilidade do que a de qualquer outranão foram expostos ao inseticida proporcionam refugia espécie de carrapato que infesta cães e gatos.de ovos não expostos de pulgas, larvas, pupas e adultospré-emergidos. Uma vez que parasitem um hospedeiro, as Gerenciamento de Refugia (evitando administraçãoCtenocephalides felis adultas são ectoparasitas bastante química a uma proporção de indivíduos suscetíveis) épersistentes; no entanto, esta pulga infesta uma grande uma estratégia que tem sido empregada para reduzir avariedade de espécies de hospedeiros alternativos resistência no futuro [17,56], mas que não é empregadoincluindo coiotes, raposas, linces, gambás, roedores, por médicos veterinários ao lidar com pulgas e carrapatosguaxinins, gambás, panteras, aves, bezerros e furões porque é impraticável e é provavelmente desnecessário[4,5,42]. Pulgas de gatos que infestam hospedeiros não quando se trata de pragas com grande refugia [63].tratados, incluindo gatos selvagens, também fazem partedo refugium. Alternativas a acaricidas e inseticidas Vários patógenos em potencial de pulgas ou carrapatos Considere o carrapato Rhipicephalus microplus. Este têm sido propostos como agentes de controle biológicocarrapato é resistente a produtos químicos mais do que do parasita. Tais estratégias de controle das populaçõesqualquer outro [60]. O Rhipicephalus microplus é um de pragas e manejo da resistência têm sido empregadascarrapato de um só hospedeiro. Permanece no hospedeiro50 50